Изоляция нейронов спинного мозга: процедура градиента плотности для изоляции нейронов спинного мозга новорожденных для исследований in vitro

Чтобы изолировать нейроны спинного мозга, возьмите позвоночный столб неонатальной мыши и поместите его на чашку Петри. Промойте позвоночный столб солевым раствором, чтобы освободить спинной мозг. Перенесите спинной мозг в холодную нейронную среду для повышения выживаемости клеток.

Далее измельчите спинной мозг и перенесите фрагменты в трубку, содержащую свежую нейронную среду. Инкубируйте трубку в шейкере на водяной бане для акклиматизации. После инкубации удалите отработанную среду и добавьте среду для пищеварения. Пищеварительные ферменты расщепляют тканевый матрикс, расслабляя клетки.

Выполните растирание, отсасывая фрагменты ткани в пипетку, и быстро опорожните компоненты, высвобождая отдельные клетки во взвешенном состоянии. Затем перенесите эту суспензию в пробирку, содержащую среду с градиентом плотности, и центрифугу.

После центрифугирования поверхностный слой пробирки содержит остатки ткани. Первый слой включает в себя олигодендроциты и астроциты. Второй и третий слои содержат нейроны, причем третий слой обладает наивысшей чистотой. Наконец, гранула содержит клетки микроглии.

Соберите третий слой в свежую пробирку и добавьте нейронную среду, чтобы разбавить среду градиента