Децеллюляризация сердечно-легочного комплекса: методика децеллюляризации сердца и легких на мышиной модели

Децеллюляризация лишает органы их клеточных компонентов, оставляя структуру ВКМ нетронутой. Это помогает сохранить 3D-архитектуру органов. Для проведения процедуры децеллюляризации усыпленную мышь следует перевести в положение лежа на спине. Рассеките мышь и обнажите сердечно-легочный комплекс.

Перевязывайте все крупные сосуды, исходящие от сердца, за исключением аорты и магистральных сосудов легочного круга кровообращения. Этот этап предотвращает утечку жидкости во время последующей процедуры перфузии. Создайте отверстие в трахее и вставьте через него катетер. Катетеризируйте нисходящую аорту снизу до тех пор, пока катетер не достигнет дуги аорты.

Зашить катетеры, чтобы зафиксировать их положение, и подсоединить их к перфузионному насосу. Начните перфузию с деионизированной водой. Перфузия через аорту позволяет эффективно удалять кровь из всей сердечной сосудистой системы. В конце концов, вода попадает в легочную артерию, ведущую в легкие.

После полного удаления крови из сосудистой сети легких прекратите перфузию воды и замените ее различными моющими растворами от мягких до сильных. Эта процедура лизирует клетки, высвобождая внутриклеточные компоненты, благодаря чему сердце и легкие кажутся полупрозрачными.

Снова облейте деионизированной водой, чтобы удалить оставшиеся молекулы моющего средства. Хранить децеллюляризированный сердечно-легочный комплекс в растворе, содержащем антибиотик, что обеспечивает длительный срок хранения.

Начните с бритья грудной клетки, брюшной полости и задней части усыпленной мыши машинкой для стрижки волос. Продезинфицируйте участок 70% этанолом. Затем прикрепите мышь к лотку из полистирола, удлинив ее передние и задние конечности, а также голову и хвост. Поместите его под микрохирургический микроскоп.

С помощью ножниц с прямым рисунком Майо сделайте кожный разрез, идущий от подчелюстной области к нижней части живота, и рассеките подкожно, обнажив грудную стенку и брюшину. Затем с помощью микрохирургических ножниц разрежьте большие и малые грудные мышцы вдоль шестого межреберья по обе стороны грудной стенки.

Разрежьте грудину по предыдущим разрезам ножницами по прямому рисунку. Затем завершите стернотомию, разрезав грудину вдоль ее длинной оси. Приподнимите и прикрепите обе стороны грудной стенки, чтобы обнажить сердечно-легочный комплекс. С помощью микрощипцов с круглым концом иссекайте тимус и окружающие жировые ткани, деликатно оттягивая их от прикреплений, и разрежьте пищевод микроножницами.

Отделите брахиоцефальные вены и брахиоцефальную артерию острыми микрощипцами. Затем отделите левую общую сонную артерию и левую подключичную артерию от подлежащей ткани, чтобы облегчить лигирование и прижигание. Используйте микроиглодержатель и острые микрощипцы и шов 9-0, чтобы наложить швы над появлением брахиоцефальной левой общей сонной и левой подключичной артерий. Прижгите брахиоцефальные вены.

С помощью микроножниц откройте вход, разрезав связку. Введите катетер 27-го калибра в трахею и осторожно надавливайте, пока трахея не ответвится на бронхи, стараясь не повредить бронхи. С помощью шва 6-0 наложите три шва вокруг трахеи, чтобы зафиксировать катетер.

Разрез мыши на высоте 12-го грудного позвонка. Нисходящая аорта проходит спереди от позвоночника и должна быть разделена здесь вместе с позвоночником. Ретроградно катетеризируйте аорту и проталкивайте катетер до тех пор, пока он не достигнет дуги аорты. С помощью шва наложите четыре шва вокруг аорты, начиная на 5 миллиметров ниже кончика катетера.

Подключите мышь к насосной системе с помощью силиконовых трубок и нижних разъемов. Перфузировать деионизированной водой со скоростью 200 микролитров в минуту в течение 15 минут. Затем замените перфузионный агент на 0,5% DOC, разведенный в деионизированной воде, и перфузируйте в течение ночи. На следующий день смените перфузионный агент на 0,1% SDS, разведенный в деионизированной воде, и перфузируйте в течение 8 часов. Затем перфузируйте деионизированной водой в течение 24 часов, чтобы смыть паспорт безопасности и DOC.

Резецируйте децеллюляризированное сердце и легкие, разрезав его прикрепления к грудной клетке. Хранить ткань в стерильной криопробирке в деионизированной воде с 1% пенициллин-стрептомицина и 0,3 микромолярного азида натрия при температуре 4 градуса Цельсия.