Создание мышиной модели инфаркта миокарда: хирургическая процедура по постоянному перевязке левой передней нисходящей коронарной артерии на мышиной модели

Для начала подготовьте мышь, находящуюся под наркозом, в положении лежа на спине. Сделайте продольный надрез на его шее и сместите слюнные железы. Затем отделите фасцию - слой соединительной ткани, окружающий мышцы ремня, - чтобы открыть нижележащую трахею.

Через рот введите интубационную канюлю и подтвердите точное введение трахеи через разрез. Подключите канюлю к аппарату ИВЛ, установленному на нужные параметры, которые обеспечат достаточную вентиляцию мыши.

Теперь расположите мышь в правом боковом положении пролежня. Надрежьте кожу между левыми грудными мышцами и отделите фасцию. Переключите аппарат ИВЛ на положительное давление в конце выдоха или на режим PEEP.

Выполняют левостороннюю торакотомию в третьем межреберье – разрез, сделанный между третьим и четвертым ребрами. Положительное давление в дыхательных путях в режиме PEEP позволяет избежать альвеолярного коллапса при торакотомии.

После доступа к сердцу удалите перикард. Определите левую переднюю нисходящую или ПМЖ коронарную артерию – ярко-красный сосуд, ответвляющийся от левой коронарной артерии. Артерия ПМЖ снабжает кровью большую часть левого желудочка.

Хирургическим путем перевязывают артерию ПМЖ проксимальнее левого предсердия. Такое перевязка артерии ПМЖ вызывает побледнение желудочка. Закройте разрез. Верните животное в клетку. Постоянное перевязка артерии ПМЖ препятствует кровотоку и снабжению сердечной мышцы кислородом, что приводит к их повреждению и гибели.

Используйте электрическую бритву, чтобы быстро побрить находящуюся под наркозом 25-30-граммовую мышь C57BL/6 на горле и левой стороне грудной клетки. Подтвердите отсутствие реакции на защемление пальца ноги. Нанесите мазь на глаза животного. Положите мышь в лежачем положении на грелку и подложите под голову небольшой марлевый компресс, чтобы избежать перегрева глаз.

Закрепите конечности скотчем. Проденьте петлю из шелкового шва 5-0 под верхние резцы и закрепите конец петли на грелке, чтобы рот оставался открытым во время канюляции. Нанесите крем для депиляции на предварительно выбритые участки и аккуратно помассируйте ватным тампоном в течение 1 минуты.

Удалите излишки шерсти и крема с помощью марли и очистите открытые участки кожи каплями 0,9% физиологического раствора и марлей. Приложите кусочки стерильной марли к выбритому горлу и грудной клетке и пропитайте марлю йодоповидоном. Установите аппарат ИВЛ на дыхательный объем 7 миллилитров на килограмм и скорость вентиляции 140 ходов в минуту.

Переместите мышь под микрохирургический стереомикроскоп. Придерживая кожу по центру горла, сделайте разрез 0,5 сантиметра по каудальной/головной линии и отделите доли слюнной железы. С помощью изогнутых щипцов аккуратно отделите фасцию грудиноягодной мышцы до тех пор, пока не станут видны гортань и трахея. Затем закрепите края проема с помощью втягивающих устройств, прикрепленных к резинкам.

Затем аккуратно потяните язык в сторону и с помощью щипцов введите затупленную внутреннюю иглу канюли 16-го калибра в трахею. Визуализируйте правильное введение в трахею через разрез в горле и подключите канюлю к аппарату искусственной вентиляции легких. Поместите на разрез стерильный 0,9% физиологический раствор с добавлением марли, пропитанной йодоповидоном, чтобы ткани оставались влажными во время операции.

Затем опустите выхлопную трубку в воду. Наличие пузырьков свидетельствует об успешной интубации. Для перевязки левой передней нисходящей коронарной артерии или ПМЖ осторожно переместите мышь в положение правой стороны и снова зафиксируйте левую переднюю конечность в новом положении.

Определите линию между левой грудной, малой и большой мышцами и сделайте косой 1-сантиметровый разрез кожи по этой линии. С помощью тупых рассекающих микроножниц отделите фасцию грудных мышц, не разрезая ткани, и используйте ретракторы, прикрепленные к эластичным лентам, для поддержания разделения.

Установите вентилятор с положительным давлением в конце выдоха 3 сантиметра воды. С помощью тупых щипцов откройте грудную полость в третьем межреберье между третьим и четвертым ребрами. Поместите два ретрактора в грудную клетку, по одному на каждое ребро, и с помощью изогнутых тонких щипцов аккуратно удалите перикард, не причиняя вреда сердцу и легким.

Определите ПМЖ как поверхностную ярко-красную линию, идущую от края левой ушной раковины к вершине. С помощью иглодержателя проведите шелковый шов 7-0 под ПМЖ, на 2-3 миллиметра ниже левого предсердия. Медленно натягивая шелк, чтобы не порвать сердечную ткань, завяжите лигатуру тремя узлами. Нижняя левая часть левого желудочка мгновенно бледнеет после перевязки.

Теперь отпустите ретракторы ребер и, удерживая третье ребро щипцами, сделайте два прохода шелковым швом 6-0 под третьим и четвертым ребрами. Поместите три капли 37 градусов Цельсия, 0,9% физиологического раствора на отверстие и закройте выхлопную трубку на 2 или 3 дыхательных цикла, чтобы правильно надуть легкие.

Затяните и закрепите шов двумя нажатиями и отпустите ретракторы, удерживающие мышцы, помогая мышцам вернуться в правильное анатомическое положение. Затем закройте кожу грудной клетки двумя швами и двумя накидками из шовного шелка 5-0. Закройте кожу горла одним стежком, швом 5-0 шелковым и двумя накидками.