Энциклопедия экспериментов JoVE
Биология
0 просмотров • 4:51 мин. • July 8th, 2025
Аортальный клапан сердца представляет собой трехстворчатую структуру, состоящую из внутренних интерстициальных клеток клапана или ВИК, распределенных по плотному внеклеточному матриксу и вышележащим эндотелиальным клеткам клапана или ВЭК.
Чтобы изолировать ВИЦ, сначала подготовьте усыпленную мышь в лежачем положении. Через срединный разрез брюшной полости и грудной клетки обнажите сердце. Сделайте небольшую зазубрину между левым предсердием и желудочком с последующей перфузией физиологическим раствором для отвода крови. Разрежьте восходящую аорту на уровне дуги аорты и заберите сердце.
Пересеките и отбросьте дистальные две трети желудочков, а затем продольно рассеките оставшуюся часть сердца, чтобы выявить «U-образные» створки аортального клапана. Вырежьте листочки и промойте охлажденным буфером для удаления крови.
Впоследствии обработайте листочки низкоконцентрированным раствором коллагеназы и инкубируйте. В низких концентрациях коллагеназа - протеолитический фермент - лишь частично расщепляет внеклеточный матрикс, вытесняя поверхностные VECs из створок.
Центрифугируйте и замените содержащую фермент надосадочную жидкость буфером, переложив ресуспендированную гранулу в чашку Петри.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео