Пренатальное извлечение эмбрионов мышей: процедура забора эмбрионов у беременной мыши

Эмбрионы мышей используются в качестве модельных систем для изучения раннего эмбриогенеза млекопитающих. Чтобы получить перинатальные эмбрионы мышей на желаемой стадии эмбрионального развития, начните с усыпленной беременной мыши в положении лежа на спине.

Далее простерилизуйте его брюшную область и сделайте поперечный разрез на брюшной стенке, чтобы выявить нижележащие маточные рога. Рога матки представляют собой длинные трубчатые структуры, содержащие цепочку эмбрионов. Теперь аккуратно отделите рога матки от брюшной полости, исключив их из окружающих тканей.

Переложите собранные маточные рожки в посуду с буфером. Промойте рога матки, чтобы удалить остатки тканей и кровь. Далее сделайте надрез между местами имплантации вдоль маточных рогов, чтобы отделить каждый эмбрион. Удалите децидуа, материнский плацентарный слой, вместе с плацентарным диском, полученным из эмбриона.

Далее удаляют небольшую внеэмбриональную пленчатую структуру, окружающую эмбрион, обеспечивающую его питанием – желточный мешок. Наконец, удалите амниотическую оболочку - самую внутреннюю внеэмбриональную оболочку, состоящую из заполненного жидкостью мешочка, который окружает и защищает эмбрион - чтобы освободить эмбрион мыши.

Восстановленные перинатальные эмбрионы могут быть использованы для изучения раннего развития млекопитающих.

Очистите ножницы и щипцы для препарирования 70% этанолом. Чтобы собрать перинатальные эмбрионы в точке Е18.5 или Е19.5, сначала усыпляют беременных мышей с помощью ингаляции углекислого газа. Затем выполните вывих шейки матки в соответствии с рекомендациями NIH.

Далее распылите 70% этанол на брюшную поверхность живота. Затем, используя стерильные препарирующие ножницы и щипцы, в конце концов откройте брюшную полость. Приподнимают всю матку и отделяют ее от тела на кончиках маточных рогов. Затем промойте всю матку 1x PBS в чашке Петри.

Разрезать матку сегментарно с помощью пресекающих ножниц и удалить децидуальную пальце с помощью рассекающих щипцов, чтобы обнажить эмбрионы в желточных мешках. Сначала удалите желточный мешок, а затем удалите амниотическую оболочку с помощью рассекающих щипцов, чтобы освободить перинатальные эмбрионы.