Изоляция яичников неонатальной мыши: хирургическая процедура забора пары яичников у неонатальной модели мыши

Чтобы изолировать яичники новорожденной мыши, начните с усыпления новорожденного мышиного щенка в положении лежа на спине на хирургической платформе. Сделайте длинный хирургический разрез на коже и стенке тела, чтобы обнажить брюшную полость. Далее аккуратно сместите кишечник, чтобы выявить нижележащие маточные рога.

Маточные рога представляют собой две длинные трубчатые структуры, которые сходятся у шейки матки и простираются от мочевого пузыря в сторону почек. Определите яичники – небольшие железы овальной формы – расположенные чуть ниже почек на кончике маточных рогов, соединенных через яйцеводы.

Теперь разрежьте место прикрепления яичника от каждого маточного рога, чтобы освободить яичники. Немедленно перенесите иссеченные яичники в стерильную чашку для посева, содержащую подходящую предварительно подогретую среду для поддержания жизнеспособности ооцитов в ткани. Поместите чашку для культуры на нагретый предметный столик препарирующего микроскопа.

С помощью иглы осторожно удалите яичниковую сумку, мешочек соединительной ткани, окружающий яичник, и любые остатки яйцевода. Наконец, переложите яичники в многолуночный планшет, содержащий среду. Выделенные яичники могут быть использованы для последующей обработки.

Начните с того, что переложите по 1 миллилитру среды для вскрытия в каждую стерильную стеклянную чашку для эмбрионов. После выбраковки щенков в возрасте от 0 до 5 дней после рождения возьмите кожу, покрывающую брюшную стенку, тонкими щипцами и разрежьте кожу и стенки тела. Раскройте этот большой разрез, обнажив брюшную полость. На этой стадии мочевой пузырь обычно набухает и может быть проколот, чтобы облегчить расслоение.

С помощью часовых щипцов отодвиньте кишки в сторону. Затем с обеих сторон проследите за рогами матки от мочевого пузыря до почки. Яичник представляет собой облачную структуру, расположенную чуть ниже почки в верхней части матки. Аккуратно возьмитесь за яичник и с помощью ножниц отрежьте его от матки. Рассекая оба яичника, переложите их в посуду, наполненную теплой средой для рассечения.

Для препарирования яичников используйте диссекционный микроскоп с нагретым до 37 градусов Цельсия предметным столиком. С помощью инсулиновых игл обрежьте мешок синовиальной сумки и любой излишки материала, включая фаллопиеву трубу, пока не останется только яичник. Затем переложите каждый завязь в лунку подготовленной тарелки с помощью изогнутой пипетки.