$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Желчевыводящая система состоит из печени, желчного пузыря и сети протоков, которые соединяются, образуя общий желчный проток или C-B-D, который транспортирует желчь в кишечник.
Для литья смолы желчевыводящей системы возьмите мышь, которая была перфузирована для удаления крови из печени и желчного пузыря.
Поместите мышь в положение лежа на спине.
Визуализируйте брюшную полость под микроскопом для вскрытия, чтобы определить висцеральную поверхность печени для идентификации сфинктера Oddi - мышечного слоя, присутствующего на дистальном конце КБД перед его попаданием в кишечник.
Сделайте косой надрез в КБД рядом со сфинктером Одди.
Вставьте трубку в КБД. Подсоедините другой конец трубки к шприцу, содержащему цветную и рентгеноконтрастную смоляную суспензию.
Введите в проток суспензию смолы.
Смола перемещается из КБД в сеть более мелких желчных протоков, в конечном итоге распространяясь внутри печени и желчного пузыря. Распространение можно отследить, визуализировав движение цветной смолы через клеммы небольших воздуховодов.
Снимите трубку и дайте смоле полимеризоваться.
Получите микрокомпьютерные снимки протоков. Рентгеноконтрастная смола не пропускает через себя рентгеновские лучи, обеспечивая контраст с желчевыводящей системой и помогая в анализе ее 3D-архитектуры.
Перед введением смолы в желчевыводящую систему мыши начните перемещать кишечник и поджелудочную железу на левую сторону мыши с помощью ватного тампона, смоченного в PBS, чтобы обнажить общий желчный проток и воротную вену. Затем сделайте небольшой поперечный разрез в нижней полой вене. Поверните вентральную сторону печени к сердцу, чтобы обнажить висцеральную поверхность и прикорневую область, и найдите общий желчный проток, который проходит от прикорневой области через поджелудочную железу и впадает в кишечник в сфинктере Одди. С помощью прямых щипцов очистите область окружающих тканей примерно на расстоянии примерно 5 миллиметров от общего желчного протока.
Затем, поместив шелковую шовную нить под общий желчный проток, завяжите свободный верхний узел вокруг общего желчного протока. Прижмите пружинные ножницы к общему желчному протоку, чтобы сделать косой разрез общего желчного протока в том месте, где общий желчный проток входит в поджелудочную железу и кишечник, рядом со сфинктером Одди. Затем смешайте 1 миллилитр желтой смолы с 50 микролитрами отвердителя MV и наполните шприц Люэра 1 миллилитром смеси отвердителя смолы.
Подсоедините заполненный шприц к набору трубок #1 и нажмите на поршень, чтобы заполнить трубку, пока смесь полимера не начнет капать с кончика трубки. С помощью щипцов выпрямите область вокруг разреза общего желчного протока, прежде чем вставлять трубку в отверстие в общем желчном протоке, причем самый длинный край скошенного кончика должен быть направлен вниз к тыльной стороне желчного протока. Затем затяните узел шелковой нити, чтобы закрепить трубку внутри общего желчного протока.
После введения смолы в общий желчный проток осмотрите желчный пузырь и отдельные доли печени. Помассируйте печень ватным тампоном, смоченным в PBS, чтобы смола равномерно распределилась. На поверхности печени будут слабо заметны концевые ветви желчных протоков, заполненные смолой. Прекратите инъекцию смолы при появлении точек смолы на поверхности печени или при возникновении сопротивления. Затем удалите трубку, вытащив ее из общего желчного протока, и быстро затяните шелковый узел с помощью щипцов, чтобы смола не вытекла.