Моделирование фототромботического инсульта на мышиной модели: метод лазерного излучения через череп мыши после введения светочувствительного красителя для индуцирования фототромбоза

Для начала стабилизируйте мышь под наркозом в стереотаксическом блоке. Прикрепите щуп для контроля температуры мыши. Регулируйте температуру его тела с помощью грелки.

Далее простерилизуйте место операции и сделайте продольный разрез, чтобы обнажить череп.

Соскребите с поверхности черепа подлежащую надкостницу – слой соединительной ткани.

Определите коронковый шов и отметьте интересующее положение со стороны брегмы – точки пересечения коронального и сагиттального швов.

Закрепите на отмеченном участке ленту с небольшой апертурой, чтобы ограничить облучаемую область при лазерном освещении. Теперь введите нужный светочувствительный краситель в брюшную полость мыши.

Введенные молекулы красителя проходят через кровеносную систему и достигают мозга.

Затем расположите соответствующий лазерный источник над отмеченной областью и освещайте область в течение желаемой продолжительности. После нагревания циркулирующий краситель активируется и производит высокоактивные формы кислорода. Они действуют путем повреждения мембран эндотелиальных клеток в кровеносных сосудах в освещенной области.

Повреждение эндотелиальных клеток способствует местной активации и агрегации тромбоцитов и последующему образованию тромбов, прерывая местный мозговой кровоток. После этого регидратируйте череп с помощью физиологического раствора. Закройте хирургический разрез и верните мышь в клетку.

Прерывание мозгового кровотока повреждает мозговую ткань, что приводит к дисфункции мозга у мыши.

Измерьте массу тела мыши, чтобы скорректировать дозу Rose Bengal для инъекции. Установите соответствующую грелку с обратной связью для поддержания температуры тела мыши. После того, как мышь будет полностью обезболена и зафиксирована в стереотаксической рамке, аккуратно введите ректальный зонд, чтобы контролировать температуру тела мыши на протяжении всей хирургической процедуры. Нанесите глазную мазь с декспантенолом на оба глаза, а кожу и окружающую шерсть очистите дезинфицирующим средством.

С помощью ножниц сделайте один продольный разрез длиной от 2,0 до 2,5 сантиметра и втяните, чтобы обнажить череп. С помощью ваты аккуратно удалите надкостницу и найдите коронковые швы. Наденьте защитные очки при включении 561-нанометрового лазера, а слева отметьте брегму на отметке +3 миллиметра. Затем выключите лазер, и зацепите наклейку отверстием диаметром 4 миллиметра в отмеченных координатах.

Введите мышке внутрибрюшинно Розовую Бенгалию. Поместите лазерный луч на расстоянии от 4 до 5 сантиметров от черепа. Включите лазер, и подсвечивайте череп в течение 20 минут. Увлажните череп, нанеся две капли 0,9% физиологического раствора. После наложения швов на рану поместите мышь в операционную камеру при температуре 37 градусов Цельсия, чтобы она восстановилась после анестезии. Через час поместите мышь обратно в клетку в комнате с регулируемой температурой.