Мышиная модель трансплантации островковых клеток: хирургический метод вливания островков поджелудочной железы в воротную вену и профилактика послеоперационных кровотечений

В мышиной модели инсулинозависимого диабета островки поджелудочной железы вводятся через воротную вену печени в терапевтических целях. Бета-клетки в островковом кластере вырабатывают инсулин – гормон, регулирующий уровень глюкозы в крови.

Интрапортальная инъекция является простой и эффективной методикой, но послеоперационные кровотечения часто приводят к гибели модельного животного. Чтобы предотвратить это осложнение, подготовьте мышь под наркозом в лежачем положении. Побрейте область живота и нанесите дезинфицирующий раствор. Сделайте надрез, чтобы обнажить брюшную полость. Выведите кишечник из брюшинной полости наружу на влажную марлю, чтобы обнажить нижнюю воротную вену.

Возьмите с собой инсулиновый шприц, предварительно загруженный островками. Введите иглу прямо параллельно в воротную вену фаской вниз. Наберите немного крови в шприц, чтобы смешать островки, а затем медленно вводите. Потяните и нажмите на поршень несколько раз, чтобы напитать всю островковую суспензию. Теперь поместите желатиновую губку, чтобы покрыть место инъекции.

Желатин, гемостатический матрикс, поглощает кровь и набухает, образуя стабильный сгусток над местом прокола, тем самым останавливая кровотечение. Далее верните кишечник в брюшную полость и зашите разрез. Верните мышь в домашнюю клетку и регулярно следите за признаками выздоровления.

После подтверждения отсутствия реакции на педальный рефлекс нанесите мазь на глаза, чтобы предотвратить высыхание. Выбрейте брюшную полость мыши, находящейся под наркозом, чтобы удалить шерсть, и продезинфицируйте операционную область тремя чередующимися салфетками с содержанием 2% йода и 75% спирта.

Далее сделайте разрез от 1 до 1,5 сантиметра в области живота, и откройте брюшинную полость. Наложите на разрез стерильный кусок марли и с помощью щипцов или ватных наконечников аккуратно перенесите кишечник на марлю. Затем накройте кишечник куском марли, смоченной в физрастворе, и обнажите воротную вену.

Чтобы остановить кровотечение, вызванное переносом островков, с помощью гелевой пены держите иглу скосом вниз и расположите кончик иглы отверстием параллельно стенке воротной вены. Перед введением иглы в воротную вену втяните поршень, чтобы набрать от 20 до 50 микролитров крови в шприц, чтобы смешать ее с островками, прежде чем вводить островки в воротную вену, многократно нажимая и втягивая поршень.

Когда все островки будут доставлены, поместите примерно 0,5 х 0,5 сантиметра куска гелевой пены на место инъекции. Ватным наконечником придавите гелевую пену вниз, одновременно извлекая иглу из воротной вены. Удерживайте гель на месте около двух минут, раскатывая гелевую пену, чтобы убедиться, что она покрывает воротную вену.

Как только кровотечение прекратится, аккуратно верните кишечник в брюшную полость в исходное положение и введите в брюшную полость 500 микролитров теплого физиологического раствора. Используйте швы, чтобы закрыть мышечные и кожные слои. Затем поместите мышь в чистую клетку на грелку с контролем до полного восстановления после анестезии, вводя анальгезию каждые 12 часов и нагревая в течение 48 часов.