Установка сборки черепного кольца на мышиной модели: хирургическая процедура имплантации сборки окна визуализации на черепе мыши для визуализации костного мозга черепа с высоким разрешением

Для имплантации черепа черепа мыши сначала подготовьте мышь под наркозом в положении лежа. Затем сделайте вертикальный разрез по средней линии, чтобы обнажить кальварию — верхнюю часть черепа, которая защищает полость черепа, окружающую мозг.

Теперь осторожно удалите подлежащую надкостницу — плотный слой сосудистой соединительной ткани — и любые остатки ткани для оптимальной визуализации. Очистите открытую поверхность черепа солевым раствором.

Далее нанесите на металлическое кольцо с черепом цианоакрилатный клей. Закрепите его на нужном участке сухого обнаженного черепа.

Удерживайте кольцо на месте, чтобы оно могло прочно прикрепиться к черепу. Поддерживайте поверхность черепа увлажненной с помощью физиологического раствора. Закрепите кольцо в области черепа с помощью стоматологического цемента, чтобы предотвратить утечку во время последующей визуализации.

Заполните кольцо физиологическим раствором, который выступает в качестве иммерсионной среды для микроскопии с высоким разрешением.

Перенесите мышь с кольцевым подшипником черепа на опорную пластину, прикрепленную к держателю блока. Голова мыши приподнята, чтобы предотвратить отслоение кольца от черепа.

Закрепите кольцо на держателе блока, чтобы обездвижить голову мыши и предотвратить появление артефактов движения, вызванных дыханием, во время визуализации. Расположите опору и мышиный узел для прижизненной визуализации через кость черепа, что облегчает визуализацию специализированных клеток и их нативной среды в режиме реального времени в подлежащем костном мозге.

Продезинфицируйте кожу головы 70% этанолом с помощью бумажного полотенца, одновременно удаляя выпавшие волосы. С помощью стерильных ножниц и пинцета сделайте Т-образный разрез по средней линии на расстоянии до 1 сантиметра между ушами на коже головы, чтобы обнажить кальварий.

Обнажите череп пинцетом. Затем с помощью ножниц и пинцета аккуратно удалите надкостницу. Используйте стерильный ватный тампон, смоченный физиологическим раствором, чтобы удалить всю надкостницу и любой мусор или волосы, которые могут повлиять на изображение. Промойте череп солевым раствором, чтобы удалить любые следы крови, и быстро высушите кость ватным тампоном.

Нанесите клей гель на кольцо. Поместите кольцо на обнаженную кость и удерживайте его в течение нескольких секунд, чтобы кольцо прочно прилегло к черепу. Слегка смочите череп ватным тампоном, смоченным в солевом растворе.

Приготовьте силиконовую зубную пасту, тщательно смешав синие и желтые компоненты в соотношении 1 к 1. Запечатайте кольцо, нанеся зубную пасту, чтобы предотвратить утечку во время визуализации. Осторожно удалите зубную пасту или клей, которые могли попасть в кольцо. Затем заполните кольцо физиологическим раствором, чтобы проверить утечку.

Поместите мышь на опору, а под голову животного подложите сложенный компресс, чтобы поднять голову и предотвратить отслоение кольца от черепа при прикреплении к держателю. Накрутите кольцо на держатель блока. Поместите опору и мышь в сборе в нагретую камеру микроскопа.