Извлечение чашечки сетчатки у мыши: хирургическая процедура для получения неповрежденной чашечки сетчатки из глаза мыши

Мышиный глаз покрыт тремя слоями: самой наружной фиброзной склерой, средней сосудистой оболочкой и самой внутренней сетчаткой. Чашеобразная полость между сетчаткой и хрусталиком глаза содержит стекловидное тело — студенистую среду, которая помогает пропускать свет к сетчатке. В свою очередь, сетчатка передает полученную визуальную информацию через зрительный нерв в мозг.

Чтобы извлечь чашу сетчатки, возьмите усыпленную мышь и энуклеируйте ее глаз. Погрузите глаз в чашку Петри, содержащую соответствующий ледяной буфер для предотвращения деградации тканей. Поместите чашку Петри под диссекционный микроскоп.

Отрежьте остатки зрительного нерва от основания глазного яблока. Сделайте небольшой разрез на стыке сетчатки и роговицы — прозрачного покрытия вокруг хрусталика глаза. Используя это отверстие, сделайте полный круговой разрез вдоль соединения сетчатки и роговицы, чтобы отделить хрусталик и стекловидный гуморальный гель от глаза.

Удалите хрусталик и стекловидное тело, чтобы получить полукруглую наглазницу, содержащую сетчатку, выстланную сосудистой оболочкой и склерой. Сделайте несколько поверхностных разрезов по всей склеральной части наглазника. Используйте эти надрезы для разделения внешних слоев глаза, чтобы получить неповрежденную чашечку сетчатки для последующего применения.

Извлеките глаза взрослой усыпленной мыши и поместите их в ледяную PBS в чашке Петри, а затем поместите чашку Петри под микроскоп для вскрытия. С помощью микроножниц отрежьте зрительный нерв, затем осторожно удалите лишние прямые мышцы, прикрепленные снаружи глазного яблока.

С помощью иглы 30-го калибра проделайте отверстие по краю роговицы. Затем с помощью микроножниц для тонкого рассечения сделайте круговой разрез по краю роговицы. С помощью острых щипцов для рассечения удалите роговицу, хрусталик и стекловидное тело из наглазника. Сделайте несколько небольших надрезов на склеральном слое по краю наглазника с помощью микроножниц для тонкого рассечения. Используйте два острых щипца для рассечения, чтобы ухватиться за склеральную ткань с каждой стороны, и очень осторожно потяните за склеральный слой, чтобы удалить его из нервной сетчатки. Повторяйте это вокруг наглазника, пока все склеры не будут удалены, и не получится неповрежденная чашечка сетчатки.