Энциклопедия экспериментов JoVE
Биология
0 просмотров • 4:19 мин. • July 8th, 2025
Для начала закрепите усыпленную мышь в лежачем положении. Разрежьте латерально через грудную стенку, чтобы получить доступ к грудной полости и обнажить сердце. Иссеките правое предсердие и введите физиологический раствор в левый желудочек для отвода крови от сердца.
Разорвите сосудистые соединения, отрезав основные кровеносные сосуды. Далее следует надрезать легочную артерию на подходящем расстоянии от желудочково-артериального перехода, который служит каналом для повышения давления. Удалите желудочки, чтобы подвергнуть желудочковую сторону воздействию атмосферного давления.
Теперь закрепите наддувную трубку в легочной артерии, обеспечив достаточный зазор между желудочково-артериальным переходом и концом трубки, чтобы створки клапана могли перемещаться во время нагнетания давления.
К трубке подсоедините заполненный солевым раствором резервуар, закрепленный на расчетной высоте относительно легочного клапана на основе желаемого гидростатического давления, которое должно быть приложено к артериальной стороне клапана. Однонаправленный поток с артериальной стороны под действием гидростатического давления приводит к закрытию створок клапана и расширению легочного ствола.
Впоследствии введите в резервуар подходящий фиксатор и продолжайте перфузию. Перфузированный фиксатор стабилизирует клеточную морфологию и тканевую архитектуру.
Наложите на ткань марлю, смоченную в фиксаторах, чтобы зафиксировать ткань вокруг клапана и предотвратить высыхание. Храните неподвижный сердечный клапан в фиксирующем виде до использования.
Начните с автоклавирования инструментов, необходимых для вскрытия мыши, включая тонкие ножницы, микрощипцы, микрососудистые зажимы, щипцы для наложения зажимов, держатели микроигл, пружинные ножницы и втягивающие устройства.
После усыпления взрослой мыши C57 Black 6 поместите ее в спинное лежачее положение на поднос, закрепите ее конечности лентой и выполните торакотомию. Обнажите сердце, удалив излишки жировой ткани и фасции, затем удалите правое предсердие и перфузируйте левый желудочек солевым раствором комнатной температуры.
Удалите все сердце, разрезав верхнюю полую вену, нижнюю полую вену, легочную артерию и аорту, и разрежьте примерно на 2 миллиметра выше желудочково-артериального соединения, которое будет служить каналом для давления.
Удалите левый и правый желудочки, чтобы подвергнуть камеры воздействию атмосферного давления, убедившись, что структура легочного ствола не затронута удалением желудочков. Трубка под давлением анастомозы с легочной артерией, оставляя примерно 1-миллиметровое расстояние между синотрубчатым соединением и концом трубки, чтобы приспособиться к большим перемещениям створок и легочного ствола.
Поднимите резервуар до аналогичного физиологического давления и заполните его солевым раствором. Проверьте проточную систему, чтобы убедиться в отсутствии засоров или пузырьков воздуха. Прикрепите запорный кран к анастомозированному легочному клапану и обеспечьте достаточный поток через трубку, переключив выходной тракт. Как только поток станет достаточным, переключите отток на анастомозированный легочный клапан и обеспечьте давление в легочном стволе, определяемое по растяжению ствола.
После подтверждения давления в легочном стволе постепенно вводите первичный фиксирующий раствор, пока не будет очищено 25% емкости резервуара физиологического раствора. Наложите на образец ткани марлю, смоченную в фиксаторах, чтобы предотвратить высыхание. Перфузируйте фиксатор в течение 3 часов, повторно наполняя резервуар для поддержания постоянного давления.
После перфузии храните сердечный клапан в фиксирующем растворе при температуре 4 градуса Цельсия до использования, до 1 недели.