Модель лимфедемы мышиного хвоста: метод in vivo для создания устойчивой лимфедемы в мышином хвосте

Лимфатические сосуды присутствуют в дерме кожи и их функция заключается в удалении избытка интерстициальной жидкости из тканей. Повреждение лимфатических сосудов вызывает избыточное накопление жидкости в интерстициальном пространстве и увеличение подкожного отложения фиброзной и жировой ткани. Эти изменения приводят к лимфедеме.

Чтобы вызвать лимфедему в мышином хвосте, возьмите мышь под наркозом и поместите ее в положение лежа. Сделайте круговое иссечение кожи на всю толщину на соответствующем удалении, дистальнее основания хвоста. Надрезайте еще один участок на хвосте, уступающий первому срезу.

Сделайте вертикальный разрез кожи, соединив два заранее сделанных разреза. С помощью этого разреза иссекайте наложенный кожный пластырь, чтобы обнажить боковые вены и лимфатические сосуды.

Возьмите шприц, содержащий цветной краситель для слежения, и введите его подкожно в район конца хвоста, отчего лимфатические сосуды кажутся синими. Пересеките лимфатические сосуды, оберните место раны и наблюдайте за мышью в течение желаемого периода времени.

Микродиссекция останавливает поток лимфы в сосудах и скопление жидкости в пространстве тканей. Следовательно, устойчивая лимфедема наблюдается в виде отека хвоста мыши дорсально к месту операции.

Для начала расположите 8-недельную мышь под действием седативных препаратов строго и подготовьте хвост с помощью 70% изопропилового спирта. Используйте суппорт для измерения диаметра хвоста с шагом 5 миллиметров, начиная с 20 миллиметров от основания хвоста. Отметьте 3-миллиметровый надрез по окружности на хвосте в 20 миллиметрах от основания.

Под хирургическим микроскопическим увеличением выполните тщательное 3-миллиметровое иссечение кожи на всю толщину, оставляя всю подлежащую сосудистую сеть нетронутой. Надрежьте верхнюю окружную отметину, сначала через дерму, а затем окружной разрез на всю толщину на 3 миллиметра дистальнее первого разреза. Сделайте перпендикулярный вертикальный разрез на всю толщину, чтобы соединить два разреза, затем используйте зубчатый тонкий звукосниматель, чтобы захватить передний край, и рассеките глубоко в аваскулярной плоскости до дермы и поверхностно до вены с помощью микроножниц.

Введите 0,1 миллилитра 1% изосульфана синего подкожно проксимальнее кончика хвоста. Определите два лимфатических канала, которые кажутся синими из-за инъекции, примыкающие к боковым хвостовым венам. Осторожно пересеките лимфатические сосуды, рассекая плоскость между боковой веной и лимфатической прямыми микрохирургическими ножницами. Проведите кончик одного лезвия ножницы между лимфатическим сосудом и боковой веной и закройте лезвия, чтобы пересечь лимфатический сосуд. Когда закончите, перевяжите рану хвоста стерильной адгезивной прозрачной повязкой.