Колоноскопическая модель мышиной раны: метод выделения раневого ложа, вызванного биопсией, из толстой кишки для понимания процесса заживления

Биопсия под контролем колоноскопии на мышиных моделях индуцирует раневые участки в толстой кишке. Эти раневые ложа изолируются для молекулярных и гистологических исследований, чтобы понять процесс заживления ран при воспалительных заболеваниях желудочно-кишечного тракта, или желудочно-кишечного тракта.

Чтобы начать изоляцию раневого ложа, поместите усыпленную экспериментальную мышь с колоноскопической раной в положение лежа на спине. Разрежьте кожу живота и нижележащие мышцы, чтобы обнажить полость тела.

Подложите закрытые ножницы под толстую кишку и поднимите ее. Разрежьте толстую кишку в ее средней точке, а в области анального отверстия отделите ее от тела. Промойте толстую кишку соответствующим буфером, чтобы удалить содержимое кала.

Поместите двоеточие на фильтровальную бумагу и разрежьте его в продольном направлении, стороной брыжейки вниз на фильтровальной бумаге. Теперь добавьте метиленовый синий краситель на толстую кишку и понаблюдайте под микроскопом.

Краситель окрашивает мертвую и зернистую ткань в раневом ложе, делая ее темнее окружающих здоровых тканей, что позволяет легко идентифицировать ее. Сохранение изолированного раневого ложа для исследований экспрессии генов.

В соответствующей экспериментальной конечной точке вскрыть слои кожи и мышц брюшной полости, чтобы обнажить полость тела экспериментального животного, и поместить закрытые щипцы под толстую кишку. Осторожно приподнимите толстую кишку, чтобы освободить ее от подлежащей брыжейки, и разрежьте ткань в ее средней точке и в анальном отверстии, чтобы собрать ее у мыши.

Используйте 20-миллилитровый шприц, наполненный ледяным PBS и снабженный иглой для зондирования крыс, чтобы вымыть фекальное содержимое; и поместите очищенную толстую кишку на лист фильтровальной бумаги. Откройте толстую кишку в продольном направлении, следя за тем, чтобы брыжеечная сторона была обращена вниз к фильтровальной бумаге, и с помощью пипетки Пастера покройте слизистую оболочку 0,2% метиленового синего.

Через несколько секунд слейте лишнее пятно и осмотрите толстую кишку под микроскопом, чтобы найти раневое ложе. Используйте 4-дюймовые ножницы с микрорадужной оболочкой, чтобы разрезать по краю кровати, стараясь не врезаться в мышечный слой, и используйте пинцет с тонкой острией, чтобы перенести рассеченную ткань в трубку для мгновенной заморозки и/или хранения.