Выделение миоволокон: метод получения отдельных миоволокон из собранной мышцы-разгибателя большого пальца мыши (EDL)

Начните с усыпленной мыши в положении лежа на спине. Простерилизуйте его заднюю конечность. Хирургическим путем удалите кожу и фасцию — тонкую оболочку соединительной ткани под кожей — чтобы обнажить нижележащие мышцы задней конечности.

Расположите переднюю большеберцовую мышцу или мышцу ТА на боковой стороне большеберцовой кости. Удерживая дистальное сухожилие ТА, отделите мышцу от подлежащих тканей. Разрежьте мышцу ближе к колену, чтобы иссечь мышцу ТА, обнажив нижележащую мышцу разгибателя пальца или мышцу EDL, расположенную в переднем отделе задней конечности.

Разрежьте дистальное сухожилие EDL и подтяните мышцу EDL к колену. Разрежьте проксимальное сухожилие EDL, чтобы иссечь мышцу EDL. Перенесите собранную мышцу в пробирку с предварительно подогретой средой, содержащей ферменты коллагеназы, и инкубируйте в течение соответствующего времени. Коллагеназы разрушают соединительную ткань, окружающую каждое мышечное волокно или миофибру внутри мышцы. Этот этап пищеварения высвобождает миофибры из внутреннего слоя мышцы.

После инкубации осторожно перенесите переваренную мышцу в многолуночную пластину, содержащую предварительно подогретую среду, чтобы увеличить выживаемость миофибров.