JoVE Encyclopedia of Experiments
Биология
0 просмотров • 3:37 мин • July 8th, 2025
Мозг позвоночных содержит специализированную систему обмена жидкости, аналогичную лимфатической системе, называемую глимфатической системой. В этой системе спинномозговая жидкость или ликвор попадает в периартериальные пространства, обеспечивая обмен растворенными веществами через специализированные каналы, присутствующие в астроцитарных концах стоп. Содержащая растворенные вещества спинномозговая жидкость поступает в перивенозное пространство для вымывания растворенных веществ из мозга. Этот путь имеет важное значение для физиологии мозга и может быть визуализирован с помощью флуоресцентных молекул-индикаторов.
Для начала подготовьте обезболенную свинью в положении лежа с наклоненной вверх головой. Сделайте надрез ниже затылочного гребня. Втяните мышцы, чтобы обнажить большую цистерну - отверстие в субарахноидальном пространстве между мозжечком и продолговатым мозгом.
Осторожно введите канюлю через твердую мозговую оболочку в большую цистерну. Нанесите стоматологический клей вокруг канюли. Дайте ему застыть. После этого введите флуоресцентные индикаторные молекулы, взвешенные в искусственной спинномозговой жидкости, с соответствующей скоростью. Заметно пульсирующее трассирующее решение в основании канюли подтверждает успешную доставку.
После инъекции переместите слои ткани и зашите разрез. Наложите на разрез влажную ватную марлю, чтобы ограничить потерю тепла. Дайте молекулам индикатора циркулировать в течение желаемого периода времени. При визуализации под флуоресцентным микроскопом молекулы индикаторов помогают визуализировать распределение ликвора в глимфатической системе.
Убедитесь, что один человек поднимает и сгибает голову и шею животного, в то время как другой пальпирует большую цистерну, отмечая ее анатомическое расположение. Медленно и осторожно введите канюлю 22-го калибра в большую цистерну через твердую мозговую оболочку, под углом, косым к продольной оси. Затем втяните иглу из канюли и наденьте колпачок на замок.
Начните с нанесения суперклея и ускорителя там, где канюля входит в ткани. Затем нанесите стоматологический цемент. Подождите пять минут, чтобы цемент застыл. Осторожно снимите колпачок с канюли. Прикрепите канюлю к наружному концу крана для внутривенного введения с помощью трассера с помощью удлинителя на 10 сантиметров.
Медленно вводите индикатор со скоростью 100 микролитров в минуту вручную или с помощью микроинфузионного насоса. Снимите кран для внутривенного введения и установите на место колпачок. Проверьте, виден ли индикатор, пульсирующий у основания канюли. Затем поместите мешки с песком под шею животного, чтобы сохранить некоторое сгибание.
Отпустите голову и оставьте животное в спокойном положении лежа. Освободите самоудерживающиеся ретракторы и замените мышцы. Используйте зажимы для хирургических полотенец, чтобы свести кожу вокруг мышц. Сначала используйте марлю, а затем одеяло, чтобы накрыть полотенце хомутами и разрезом, чтобы ограничить потерю тепла. Дайте индикатору циркулировать в течение желаемого периода времени.