Выделение клеток IPE и RPE: методика получения глазных пигментных эпителиальных клеток из кроличьего глаза

Клетки пигментного эпителия представляют собой терминально дифференцированные кубовидные клетки, соединенные плотными соединениями. Эти эпителиальные клетки, выстилающие радужную оболочку, являются пигментными эпителиальными клетками радужки или IPE, а те, что находятся рядом с сетчаткой, являются клетками пигментного эпителия сетчатки или RPE.

Чтобы извлечь эти клетки, берут неповрежденный кроличий глаз. Обработайте глаз дезинфицирующим средством, чтобы удалить любые микроорганизмы с поверхности глаза. Смойте дезинфицирующее средство буферным раствором. Сделайте надрез возле радужной оболочки. Используя это отверстие, сделайте полный круговой разрез вдоль границы радужной оболочки, разделив глаз на передний сегмент, содержащий радужную оболочку, и заднюю часть, содержащую сетчатку и стекловидное тело.

Возьмите передний сегмент и выбросьте хрусталик, чтобы получить доступ к радужной оболочке. Удалите ирис и положите его на чашку для культуры. Впоследствии возьмите задний отрезок и отбросьте студенистое стекловидное тело и сетчатку из глазной луковицы.

Обработайте радужную оболочку и глазную луковицу трипсином и инкубируйте. Трипсин разрушает плотное соединение и белки внеклеточного