Выделение клеток IPE и RPE: метод получения пигментных эпителиальных клеток из изолированного глаза свиньи

Свиной глаз содержит популяцию кубовидных эпителиальных клеток, которые содержат многочисленные меланосомы — органеллы, которые помогают поглощать свет, что приводит к пигментированному виду этих клеток. В зависимости от расположения этих клеток, эпителиальные клетки, присутствующие под сетчаткой, называются пигментными эпителиальными клетками сетчатки, или клетками РПЭ, а те, которые выстилают радужную оболочку, известны как пигментные эпителиальные клетки радужной оболочки, или клетки IPE.

Чтобы выделить клетки РПЭ и ИПЭ, начните с взятия свиного глаза. Погрузите глаз в подходящий дезинфицирующий раствор, чтобы удалить любые микробы, прилипшие к поверхности глаза.

Извлеките глаз из дезинфицирующего раствора и с помощью иглы сделайте небольшой надрез возле радужной оболочки. Используйте это отверстие, чтобы сделать полный круговой разрез по границе радужной оболочки. При этом передний отрезок глаза, содержащий радужную оболочку, отделяется от задней глазной луковицы, в которой находится сетчатка. Удалите лишнюю порцию и переложите радужную оболочку и глазную луковицу в отдельные посуды для культуры.

Добавьте подходящую питательную среду в пластину, содержащую радужную оболочку, и в глазную луковицу. Соскребите салфетку. Механическая сила разрыхляет эпителиальные клетки, высвобождая их в среду. Аспирация отделенных клеток IPE и RPE. Высейте их в отдельные культурные тарелки и выдержите до дальнейшего использования.

Очистите глаза от оставшейся мышечной ткани и кожи, продезинфицируйте глаза в растворе на основе йода, а затем промойте их PBS.

Чтобы изолировать клетки IPE, снимите хрусталик и вытащите радужную оболочку, как показано на рисунке. После приготовления двух ирисов добавьте 1 миллилитр готовой среды и изолируйте клетки, поцарапав плоской отполированной пипеткой Пастера, затем подсчитайте и засейте клетки. Поместите тарелку в инкубатор.

Чтобы изолировать клетки РПЭ, удалите стекловидное тело и сетчатку из заднего сегмента и поместите луковицу в чашку Петри. Заполните колбу 1 миллилитром готовой среды. С помощью изогнутой пипетки Пастера, отполированной огнем, извлеките элементы RPE, соберите клеточную суспензию внутри колбы с помощью пипетки объемом 1000 микролитров и перенесите ее в пробирку объемом 1,5 миллилитра для повторного взвешивания. Затем подсчитайте и засейте клетки, а затем инкубируйте планшет, как показано ранее.