JoVE Encyclopedia of Experiments
Биология
0 просмотров • 3:02 мин • July 8th, 2025
Ооцит свиньи окружен компактным многослойным кластером кучевых клеток, образующих кумулусно-ооцитарный комплекс или КОК. Самые внутренние кучевые клетки простирают отростки через zona pellucida ооцита. Эти процессы развивают как щелевые, так и промежуточные соединения, которые помогают в межклеточном переносе молекул между ооцитом и окружающими кучевыми клетками. Эти двунаправленные взаимодействия поддерживают жизнеспособность КОК, что является решающим фактором, определяющим успешное экстракорпоральное оплодотворение или ЭКО.
Чтобы выделить КОК, погрузите несколько фолликулов яичников свиньи в чашку Петри, содержащую среду созревания. Эта среда содержит гормоны, необходимые для созревания яйцеклеток in vitro. Рассеките фолликулы яичников, чтобы высвободить КОК и фолликулярную жидкость в чашку Петри. Эта жидкость дополняет среду созревания дополнительными питательными веществами и гормонами, необходимыми для развития ооцитов.
Аспирируйте высвободившееся фолликулярное содержимое и перенесите его в другую чашку Петри. Визуализируйте пластину под микроскопом, чтобы идентифицировать неповрежденные КОК, которые демонстрируют нормальную морфологию, состоящую из круглых ооцитов с умеренно гранулированной цитоплазмой и интактным полярным телом, окруженным кучевыми клетками.
Выделите один КОК и перенесите его в центральную лунку, содержащую среду созревания, пластины для ЭКО. Храните тарелку при оптимальной температуре до дальнейшего использования.
Чтобы выделить КОК из фолликулов среднего размера, перенесите два-три яичника в стерильную 10-сантиметровую чашку Петри, заполненную ГМ. Аккуратно разрежьте поверхность выступающих фолликулов яичников стерильным хирургическим лезвием #15, что приведет к тому, что фолликулярная жидкость и КОК вытекут в чашку Петри. Аспирируйте содержимое фолликула с помощью иглы 28 калибра, прикрепленной к одноразовому шприцу, и перенесите ее в другую чашку Петри.
Чтобы приготовить чашки Петри для ЭКО, добавьте 1 миллилитр HM в центральные лунки, а в наружные кольца поместите три-четыре капли HM. Затем с помощью поликарбонатной микропипетки переместите неповрежденные КОК в капли HM в наружных кольцах и кратковременно промойте их три-четыре раза. Когда закончите, по отдельности переложите их в центральную лунку. Храните планшеты для ЭКО в инкубаторе.
В данной статье представлен подробный протокол выделения кумулюсно-ооцитарных комплексов (КОК) из яичников свиньи. Выделенные КОК необходимы для исследований по экстракорпоральному оплодотворению (ЭКО) и лечения бесплодия, так как они поддерживают жизнеспособность и способность ооцитов к дальнейшему развитию.
Надежное выделение кумулюсно-ооцитарных комплексов (КОК) свиньи является основой исследований в области репродуктивной биологии и фертильности на ранних этапах, обеспечивая возможность проведения контролируемых исследований по экстракорпоральному оплодотворению (ЭКО). Данная методика позволяет с высокой степенью уверенности прогнозировать жизнеспособность и потенциал развития ооцитов, что напрямую влияет на разработку анализов и точность трансляционных моделей. Стандартизированная подготовка КОК необходима для создания масштабируемых и воспроизводимых рабочих процессов в рамках технологических цепочек репродуктивных технологий.
Данный протокол выделения КЭК подходит для этапов между ранними исследованиями и разработкой анализа, обеспечивая базовый материал для изучения ИВФ, дозревания и функциональной зрелости ооцитов.
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Последнее обновление: 29 августа 2026