Выделение эндотелиальных клеток аорты свиней (pAEC): метод на основе ферментов для выделения эндотелиальных клеток из собранной свиной брюшной аорты

Аорта - главная артерия, несущая насыщенную кислородом кровь от сердца к телу - состоит из трех слоев, или «туник»: внутренней интимы, средней среды и внешней адвентиции. Эндотелиальные клетки или ЭК присутствуют в интиме в виде тонкого, непрерывного монослоя над поддерживающей базальной мембраной, состоящей из структурных белков, в первую очередь коллагена.

Чтобы изолировать ЭК, начните с забора свиной аорты в чашке для культивирования. Иссеките его концы и любые окружающие адгезивные ткани, чтобы предотвратить загрязнение неэндотелиальными клетками. Промойте аорту буфером, содержащим антибиотики, чтобы подавить рост микроорганизмов.

Проведите стерильный хирургический шов через аорту и завяжите один из его концов, удерживая шов в пределах просвета. Закрепите завязанный конец и втяните шов, чтобы полностью вывернуть аорту. Это подвергает ЭК-содержащую интиму ферментативному перевариванию. Обработайте аорту предварительно подогретым раствором коллагеназы с низкой концентрацией для оптимальной активности ферментов и инкубируйте.

Коллагеназа расщепляет коллагеновые белки, присутствующие в базальной мембране, лежащей под ЭК, инициируя их диссоциацию. После инкубации добавьте охлажденны