Изоляция коротких задних цилиарных артерий: протокол иссечения неповрежденных коротких задних цилиарных микрососудов из глаза свиньи

Глазное яблоко получает кровоснабжение в основном из глазной артерии. По мере того, как глазная артерия проходит вдоль зрительного нерва, она разветвляется, образуя множественные короткие задние цилиарные артерии, или SPCA.

На задней стороне глазного яблока SPCA разветвляется на два типа ветвей. Параоптические ветви входят в склеру - самый внешний покров глаза - близко к зрительному нерву. Напротив, дистальные SPCA прокалывают склеру на небольшом расстоянии от зрительного нерва.

Чтобы выделить SPCA, возьмите свежерассеченный глаз свиньи с прикрепленным к нему зрительным нервом и остатками экстраокулярной ткани. Погрузите глазное яблоко в камеру для вскрытия, содержащую подходящий физиологический буфер.

Рассеките окружающие мышечные слои, чтобы визуализировать артерии вокруг глазного яблока. Сделайте полный круговой разрез на глазном яблоке, чтобы разделить глаз на переднюю и заднюю половины. Удалите стекловидный слой с задней половины глаза.

Визуализируйте заднюю половину глаза, чтобы найти зрительный нерв и прилегающую ретробульбарную сосудистую сеть - кровеносные сосуды за глазным яблоком. Найдите параоптические и дистальные ветви коротких задних цилиарных артерий.

Иссеките эти артериальные сегменты и промойте их нужным буфером, чтобы удалить загрязнения и остаточную кровь. Хранение SPCA для дальнейшего анализа по технологической цепочке.

Свежие глаза свиньи вместе со зрительным нервом и экстраокулярными тканями были получены на местной скотобойне сразу после вскрытия. Поместите глазной шар в камеру для вскрытия, содержащую ледяной буфер Кребса-Хенселейта. Аккуратно отрежьте окружающие мышцы и ткани острыми ножницами Майо.

Сделайте надрез скальпелем, и разрежьте глобус по экваториальной плоскости острыми ножницами Майо, пока глаз не разделится на переднюю и заднюю половины. Удалите как можно больше стекловидного тела из задней половины глаза с помощью пары щипцов стандартного образца.

После использования рассекающих штифтов, чтобы аккуратно прижать заднюю половину глаза, аккуратно разрежьте соединительную ткань, окружающую зрительный нерв, чтобы обнажить нижележащую ретробульбарную сосудистую сеть с помощью пружинных ножниц Student Vannas.

Изолируйте пару зрительной и дистальной короткой задней цилиарной артерии вместе с окружающими соединительными тканями с помощью пары прецизионных пинцетов типа 5 и капсулотомических ножниц для ванны. Аккуратно удалите соединительные ткани из артериальных сегментов с помощью пинцета и ножниц с тонким наконечником, прежде чем промывать изолированные артерии в ледяном PBS для удаления загрязнений и остатков крови.