Энциклопедия экспериментов JoVE
Биология
0 просмотров • 2:31 мин. • July 8th, 2025
Размораживание эмбрионов – это процесс, при котором криоконсервированные замороженные эмбрионы согреваются и регидратируются, восстанавливая их биологическую активность.
Чтобы разморозить криоконсервированные эмбрионы кроликов в герметичной криогенной соломинке, извлеките из соломинки жидкий азот. Эмбрионы с минимальным объемом криопротекторной среды физически изолированы воздухом и сегментами среды внутри соломинки. Ненадолго расположите соломинку на воздухе, способствуя высвобождению захваченных паров жидкого азота, которые в противном случае вызывают повреждение эмбриона при воздействии более высоких температур.
Быстрое повышение температуры криогенного жидкого азота до более высоких температур замерзания инициирует образование кристаллов льда внутри криогенной соломинки, что может привести к повреждению эмбриона. Как только начнут образовываться кристаллы льда, немедленно погрузите соломинку в водяную баню с регулируемой температурой с легким помешиванием для равномерного оттаивания. На этом этапе кристаллы льда удаляются, защищая эмбрионы от повреждения кристаллами льда.
Снимите заглушку с соломинки. Разрежьте запечатанный конец соломинки; Прикрепите микродозатор для выпуска содержимого в культуральную тарелку с сахарозосодержащими средами. Среда помогает удалить криопротекторы из эмбрионов; Сахароза предотвращает чрезмерное набухание эмбрионов, восстанавливая их физиологическую среду во время регидратации.
Перенесите эмбрионы в свежую средусодержащую пластину, чтобы полностью удалить криопротекторы, обеспечив полную регидратацию. Размороженные эмбрионы готовы к процедуре переноса эмбрионов.
Чтобы разморозить эмбрионы для переноса, поместите мини-соломинку горизонтально, на расстоянии 10 сантиметров от паров жидкого азота на 20-30 секунд. Когда начнется процесс кристаллизации внутри министроу, погрузите трубочку в водяную баню с температурой 25 градусов Цельсия на 10-15 секунд. Немедленно удалите трубочку и ватные пробки и с помощью спаренного микродозатора выдавите содержимое министроумы в тарелку, содержащую основную среду с температурой 25 градусов Цельсия с добавлением 0,33 молярного раствора сахарозы, в которой эмбрионы должны оставаться в течение 5 минут. Затем перенесите эмбрионы в тарелку со свежей базовой средой для еще одной 5-минутной инкубации.