Загрузка гранул для введения нуклеиновых кислот в адгезивные культивируемые клетки: метод загрузки флуоресцентных белков-кодирующих плазмид в адгезивные клетки млекопитающих

Начните с культивирования адгезивных клеток млекопитающих в культуральной тарелке. Переносите стерилизованные обработанные щелочью стеклянные шарики микронного размера в камеру специализированного загрузчика бисера. Закройте отверстие камеры сеткой с отверстиями оптимального размера, чтобы борта могли проходить через него во время загрузки. Закрепите сетку узлом камеры визуализации.

Извлеките носитель из пластины. Пипеткой введите в планшет суспензию флуоресцентного репортерного белка, кодирующего плазмидную ДНК для равномерного распределения по клеткам. С помощью аппарата загрузчика швов аккуратно диспергируйте монослой стеклянных шариков по ячейкам. Коротко постучите по тарелке с подходящим усилием.

Стеклянные шарики ненадолго скатываются поверх адгезивных клеток, в то время как обработка щелочью делает их менее прилипшими к клеткам. Воздействие столкновений между шариками и клетками передает адекватную деформацию, создавая локализованные нарушения в клеточных мембранах. Эти образованные переходные поры небольших размеров способствуют поглощению плазмидной ДНК в клетках, предотвращая попадание крупных гранул.

В период восстановления клеточная мембрана восстанавливается, восстанав