Опосредованная агробактериями генетическая трансформация: метод генетической трансформации генома риса с помощью генетически модифицированной агробактерии Agrobacterium tumefaciens

Agrobacterium tumefaciens, фитопатогенная бактерия, может быть генетически модифицирована путем введения искусственно приготовленной Ti-плазмиды, несущей ген, представляющий интерес в ее транспортной ДНК или Т-ДНК, и вспомогательной плазмиды, несущей гены вирулентности или Vir для переноса Т-ДНК в растительные клетки.

Для генетической трансформации, опосредованной агробактериями, начните с молодого соцветия риса и разрежьте его на мелкие кусочки. Перенесите черенки в питательную среду и инкубируйте, чтобы облегчить рост черенков в недифференцированную клеточную массу, называемую каллусом.

Теперь перенесите каллус в инфильтрационную среду для агробактерий, содержащую ацетосирингон - хемоаттрактант для агробактерий. Далее добавьте в среду культуру генетически модифицированной Агробактерии и коротко инкубируйте.

Молекулы ацетосиризона активируют белок клеточного рецептора - VirA - на мембране Agrobacterium, который в дальнейшем опосредует фосфорилирование белка-активатора транскрипции - VirG. Фосфорилированный VirG движется по направлению к хелперной плазмиде и активирует транскрипцию каскада генов вирулентности, включая белки канала и эндонуклеазы – VirD1 и VirD2.

Канальные белки обр