Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 3:59 мин. • July 8th, 2025
Для доставки плазмидной ДНК на основе электропорации в клетки первичных нейронов начните с суспензии клеток в подходящей среде для электропорации. Добавьте флуоресцентную плазмидную ДНК, кодирующую белки, для приготовления электропорационной смеси.
Аккуратно переложите электропорационную смесь в кювету для электропорации, избегая образования пузырьков воздуха, которые могут негативно повлиять на эффективность электропорации. Перенесите кювету в держатель кюветы электропоратора; Задайте параметры электропорации. Инициируйте электропорацию.
Приложенные высоковольтные короткие электрические импульсы через клеточную мембрану вызывают дифференциальное накопление заряда по обе стороны мембраны, увеличивая трансмембранный потенциал, напряжение на клеточной мембране.
Когда индуцированный трансмембранный потенциал превышает потенциал пробоя липидного бислоя, липидный бислой дестабилизируется с локальным изменением конфигурации, образуя на клеточной мембране переходные гидрофильные поры. Поры соответствующего размера обеспечивают путь для проникновения плазмидной ДНК в цитоплазму клетки.
По завершении электропорации липидный бислой повторно герметизируется, восстанавливая целостность бислоя
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео