Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 3:23 мин. • July 8th, 2025
Для доставки плазмид в ядра спорозоитов путем нуклеофекции начинают с суспензии выделенных, жизнеспособных спорозоитов - подвижной, инфекционной стадии паразитов - в буфере. Спорозоиты представляют собой клетки стройной формы, окруженные внешней плазматической мембраной и лежащим под ними внутренним мембранным комплексом, состоящим из ряда уплощенных везикул и белков, критически важных для структурной стабильности и подвижности.
Центрифугируйте суспензию для гранулирования спорозоитов. Ресуспендируйте гранулу спорозоита в подходящем объеме буфера для ядерной трансфекции, дополненного плазмидами, кодирующими флуоресцентные белки. Ядерный трансфекционный буфер с высокой буферной способностью и ионной силой обеспечивает эффективную трансфекцию при сохранении функциональности спорозоита.
Перенесите суспензию в ядерную трансфекционную кювету. Поместите кювету в держатель нуклеофекционного устройства. Запустите соответствующую программу нуклеофекции.
Во время нуклеофекции специфически приложенные короткие высоковольтные импульсы вместе с буферными составляющими временно разрушают плазматическую мембрану и комплекс внутренней мембраны, образуя трансмембранные поры, которые обеспечивают пл
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео