Биолистический-опосредованный перенос генов: метод доставки интересующего гена в клетки-мишени с помощью биолистической генной пушки

Начните с оптимального объема золотых бусин - биологически инертных и нетоксичных носителей доставки генов - в микроцентрифужной пробирке. Затем добавьте катионные агенты - спермидин и хлорид кальция, а затем желаемые фрагменты ДНК к золотым бусинам. Аккуратно переверните трубку и инкубируйте.

Хлорид кальция связывается с фрагментами ДНК и облегчает их покрытие золотых бусин остатками спермидина. Далее центрифугируйте и удалите растворитель. Ресуспендируйте покрытые ДНК шарики в этаноле. Аккуратно нанесите шарики на стерильный макроноситель. Дайте ему высохнуть.

Создание биолистической генной пушки, состоящей из ускорительной трубки газообразного гелия и бомбардировочной камеры с разрывной мембраной и стопорным экраном в соответствующих слотах. Далее переверните макронесущую мембрану и загрузите ее ниже разрывной мембраны.

После этого культивируемые клетки-мишени хозяина помещают в подходящую твердую среду с добавлением сорбита - осмотического стабилизатора для повышения эффективности трансформации. Как только установка будет готова, выстрелите из генной пушки.

По мере того, как гелий движется вниз по ускорительной трубке, давление продолжает нарастать до тех пор, пока разрывная ме