Магнитофекционная трансфекция in vitro: метод доставки плазмид в первичные нейронные клетки мыши с помощью магнитного поля с использованием магнитных наночастиц

Начните с флуоресцентной плазмидной ДНК, кодирующей белки, или суспензии пДНК в среде. Добавьте биосовместимые магнитные наночастицы, покрытые катионным полимером, в суспензию пДНК и инкубируйте.

Положительно заряженные катионные полимеры электростатически взаимодействуют и сопрягаются с отрицательно заряженной пДНК, что приводит к конденсации пДНК и образованию «магнитных полиплексов» с общим положительным зарядом.

Теперь перенесите смесь полиплекса в многолуночный планшет, содержащий адгезивную культуру первичных нейрональных клеток мыши. Установите многолуночный планшет на магнитную пластину и инкубируйте.

Магнитное поле, создаваемое магнитной пластиной, приводит к тому, что полиплексы оседают и накапливаются на поверхности нейронных клеток. Этот тесный контакт с поверхностью клетки способствует неспецифическому связыванию положительно заряженных полиплексов с отрицательно заряженными протеогликанами, ассоциированными с клеточной мембраной.

Впоследствии полиплексы интернализуются с помощью эндоцитоза – процесса, при котором локальные участки клеточной мембраны инвагинируются и отщипываются с образованием связанных с мембраной везикул, называемых эндосомами.

Внутри цитоплазмы кат