Ретровирусная опосредованная трансдукция генов: метод переноса генов для доставки трансгена в культивируемые клетки с использованием сконструированных ретровирусных векторов

Чтобы трансдуцировать клетки-хозяева с РНК, содержащими ретровирусные векторы, возьмите пробирку, содержащую упакованные векторы в подходящих средах. Каждый вектор содержит вирусный капсид, содержащий комплемент РНК трансгена, который должен быть интегрирован в геном хозяина и важные вирусные ферменты. Липидный бислой окружает капсид для облегчения проникновения в клетку-хозяина.

Добавьте векторы в присутствии подходящего реагента для трансфекции в лунку культивального планшета, содержащего суспензию клетки-хозяина. Накройте тарелку. Центрифугируйте на низкой скорости, чтобы обеспечить спиновую трансдукцию. Это приближает вирусный вектор к поверхности клетки-хозяина, повышая эффективность трансдукции.

В то же время поликатионы в реагенте для трансфекции нейтрализуют отрицательные заряды вируса и клетки-хозяина, способствуя адсорбции вируса на клетках-мишенях.

Следовательно, рецепторы на поверхности вируса способствуют его слиянию с мембраной хозяина. Вирусный капсид проникает в клетку и разрывается, высвобождая трансгенную РНК и вирусные ферменты в ее цитоплазму.

Внутри цитоплазмы вирусная обратная транскриптаза преобразует РНК в одноцепочечную комплементарную ДНК, а затем превраща