Окрашивание маслом красного цвета: методика окрашивания нейтральными липидами в гепатоцитах для выявления стеатоза печени in vitro

Стеатоз печени – патологическое состояние, характеризующееся чрезмерным накоплением жиров в гепатоцитах – ярко выраженном типе клеток печени. Жиры откладываются в виде липидных капель различного размера в цитоплазме гепатоцитов.

Структурно липидная капля содержит ядро нейтральных гидрофобных жиров, таких как триглицериды и эфиры холестерина. Ядро окружено фосфолипидным монослоем, украшенным различными белками.

Чтобы визуализировать отложение жира, возьмите многолуночный планшет, содержащий адгезивную культуру гепатоцитов. Клетки предварительно обрабатываются стеатогенной средой, чтобы индуцировать накопление липидных капель внутри них.

Добавьте нужную концентрацию параформальдегида, который диффундирует в клетки и сшивает белки. Этот этап деактивирует протеазы и сохраняет структуру гепатоцитов. Выбросьте параформальдегид и добавьте раствор Oil-red-O, содержащий органический краситель, растворенный в изопропаноле.

Изопропанол действует как растворитель-носитель для труднорастворимых молекул Oil-red-O. Это помогает молекулам красителя проникать в фиксированные гепатоциты и в конечном итоге достигать липидных капель. Попадая внутрь, краситель переходит от изопропанола к нейтральным ли