Окрашивание гладкомышечных клеток сосудов аорты по методу фон Косса: методика in vitro для оценки кальцификации медиального слоя артерии

Сосудистые гладкомышечные клетки, или VSMC, являются заметными клеточными компонентами в оболочке - среднем слое стенки кровеносного сосуда. В ответ на патологические сигналы или старение эти клетки опосредуют кальцификацию сосудов – явление накопления кальция во внеклеточном матриксе.

Возьмите многолуночный планшет, содержащий адгезивный слой предварительно кальцинированной культуры VSMC мышиной аорты. Инкубируйте клетки с раствором формалина для сшивания клеточных белков и стабилизации структуры VSMC перед окрашиванием.

Начните окрашивание фон Косса с аспирации формалина из лунки и добавления раствора нитрата серебра. Инкубируйте тарелку под подходящим источником света.

Как только раствор нитрата серебра достигает мест кальцификации во внеклеточном матриксе слоя VSMC, ионы серебра заменяют ионы кальция, связанные с фосфатами. Это приводит к переходной желтой окраске. В присутствии органических веществ и света фотохимическое разложение фосфата серебра приводит к образованию металлического серебра черного цвета.

Выбросьте максимальное количество отработанного раствора нитрата серебра. Обработайте клетки раствором тиосульфата натрия. Этот раствор преобразует остаточные соли серебра