Окрашивание метиленовым синим для оценки образования метастатической колонии in vitro: процедура окрашивания для оценки метастазирования путем количественного определения раковых клеток, собранных на мышиной модели рака

Во время метастазирования рака опухолевые клетки первичной опухоли перемещаются по кровеносной системе, экстравазируются в отдаленные органы и образуют вторичные опухоли.

Для оценки метастазирования в легкие на мышиной модели рака молочной железы, которой были введены клетки 4Т1, клетки рака молочной железы с высоким уровнем метастатического развития, готовят клеточную суспензию, включающую клетки 4Т1, выделенную из собранных легких. Центрифугируют суспензию и ресуспендируют клетки в средах, содержащих 6-тиогуанин, 6-ТГ - аналог гуанина. Высейте клеточную суспензию в культуральную тарелку.

6TG проникает в нормальные клетки, где специфический фермент трансферазы превращает его в нуклеотид 6-TG, токсичный нуклеотид. Эти цитотоксические нуклеотиды встраиваются в ДНК, вызывая повреждение ДНК, и избирательно удаляют клетки из культуры. Клетки 4T1 имеют сниженную способность образовывать токсичные нуклеотиды, способствуя их выживанию и прилипанию к пластине. В зависимости от пролиферативной способности клеток они образуют колонии.

Обработайте клетки метанолом. Метанол проникает в клетки и денатурирует клеточные белки. Инкубируйте клетки с метиленовым синим.

Положительно заряженный красит