JoVE Encyclopedia of Experiments
Биологические методы
0 просмотров • 2:27 мин • July 8th, 2025
Для окрашивания хряща начните с фиксированного формалином и залитого парафином участка хряща от усыпленной мыши.
Сначала погрузите образец в заменитель ксилола – неопасное очищающее средство, которое удаляет парафин и обнажает обезвоженную ткань. Затем обработайте образец убывающими концентрациями этанола, чтобы регидратировать ткань для последующего окрашивания.
Теперь окрасьте образец гематоксилином железа Вейгерта — органическим красителем, содержащим ионы железа, — и кратковременно инкубируйте. Молекулы гематоксилина образуют комплексы с ионами железа и проникают в клетку. Ионы железа действуют как протрава и способствуют связыванию гематоксилина с нуклеиновыми кислотами, придавая им голубой цвет.
Затем обработайте образец быстрым зеленым красителем – противокрасным пятном, которое связывается с соединительной тканью и придает зеленый цвет. После этого обработайте образец раствором уксусной кислоты для стабилизации молекул красителя. Наконец, окрасьте образец сафранин-апельсином - катионным красителем - и инкубируйте.
Положительно заряженные молекулы сафранина мигрируют к отрицательно заряженным протеогликанам в хряще и связываются с ними, придавая красный цвет. Затем установите предметное стекло в смоляную среду и визуализируйте его под микроскопом.
Здоровый хрящ выглядит интенсивно красным из-за богатого протеогликанами внеклеточного матрикса, в то время как нездоровый хрящ выглядит менее красным с признаками повреждения тканей.
Чтобы выполнить окрашивание Сафранином-О, сначала депарафинизируйте стекла в оксилене в течение трех-пяти минут, повторив ванну с оксиленом дважды. Затем увлажните горки в этаноловом градиенте, заканчивая дистиллированной водой. Затем поместите предметные стекла через раствор гематоксилина железа Weigert, 0,05% раствор Fast Green, 1% раствор уксусной кислоты и 0,1% раствор сафранина-O. Теперь установите слайды с помощью смолистой среды.