Периодическое кислотное окрашивание клеток: метод in vitro для определения уровня гликогена в мононуклеарных клетках периферической крови

Мононуклеарные клетки периферической крови, или PBMC, представляют собой циркуляторные клетки крови с одиночными крупными ядрами, состоящими из В- и Т-лимфоцитов, естественных киллеров, моноцитов и дендритных клеток. PBMC хранят избыток глюкозы в полимерной форме в виде гликогена - разветвленного полисахарида - в своей цитоплазме.

Чтобы определить присутствие гликогена в ПМЦ, необходимо подготовить однородный мазок выделенных ПМК на предметном стекле. Обрабатывайте клетки формалином - фиксирующим раствором, который сшивает клеточные биомолекулы, сохраняя структурную целостность ПМЦ.

Частично погрузите предметное стекло в раствор амилазы. Этот фермент проникает в клетки и гидролизует гликоген в обработанных клетках. Это приводит к образованию двух различных клеточных популяций - обработанных ферментами, с дефицитом гликогена, и клеток, не обработанных амилазой, богатых гликогеном.

Покройте их периодическим раствором кислоты, который окислительно преобразует гидроксильные группы молекул гликогена в альдегиды.

Промойте предметное стекло в воде, чтобы остановить реакцию окисления и удалить избыток периодической кислоты. Обработайте предметное стекло реагентом Шиффа, который вступает в