$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Чтобы визуализировать хрящевые и костные участки в срезе ткани, начните со предметного стекла, на котором будет изображен тонкий срез ткани замороженного эмбриона мыши.
Кратковременно разморозьте криоразрез и погрузите его в соответствующую концентрацию этанола, чтобы удалить криосреду. Этап удаления помогает предотвратить разрыхление среды, которое в противном случае может повлиять на визуализацию тканей во время окрашивания. Кроме того, этанол фиксирует ткани, поддерживая их морфологию и целостность.
Далее нанесите пипеткой на ткань раствор крезилового фиалки. Крезиловый фиалка, положительно заряженный основной краситель, связывается с полианионными фрагментами, такими как протеогликаны в матриксе хрящевой ткани. В то время как в минерализованной ткани, такой как кости, он реагирует с отрицательно заряженными группами, такими как фосфатные группы в костном матриксе.
Являясь метахроматическим красителем, крезилово-фиолетовый окрашивает различные участки ткани в цвета, отличные от натурального красителя, в зависимости от его взаимодействия с различными химическими компонентами в этих областях.
Теперь постирайте салфетку в подходящей концентрации этанола, чтобы удалить излишки пятна. Погружайте ткань в увеличивающуюся концентрацию этанола, чтобы заменить воду из ткани, обезвоживая ткань. Промойте ткань ксилолом, чтобы вытеснить этанол, сделав ткань прозрачной для микроскопии.
Под световым микроскопом хрящевая ткань выглядит пурпурной, в то время как костная ткань кажется коричневой, что способствует их дифференциации друг от друга, а также от окружающих тканей.
Подготовьте три промаркированные 50-миллилитровые центрифужные пробирки. Добавьте в каждую тюбик по 45 миллилитров 80% этанола. Положите на лед три трубки. Поместите на лед пробирку, содержащую 45 миллилитров 95% этанола, и пробирку, содержащую 100% этанол. Далее добавьте 45 миллилитров ксилола в 50-миллилитровую центрифужную пробирку комнатной температуры.
Кратковременно разморозьте предметное стекло мембраны PEN, приложив его к руке в перчатке, и промойте его дважды в течение 30 секунд в каждой из пробирок, содержащих 80% этанола, с перемешиванием, чтобы удалить оптимальный температурный состав для резки. Затем разложите горку на листе алюминиевой фольги. Нанесите пипеткой 0,8 миллилитра 0,1% кресилфиолета в 50% этаноле на предметное стекло и окрашивайте в течение 30 секунд.
Промойте предметное стекло в третьей пробирке, содержащей 80% этанола, в течение 30 секунд. Обезвожьте предметное стекло, пропустив его через трубку, содержащую 95% этанола, в течение 30 секунд, пробирку, содержащую 100% этанол, в течение 30 секунд и, наконец, через трубку, содержащую ксилол, в течение 30 секунд. После этого поместите предметные стекла на деликатный рабочий стеклоочиститель на 5 минут, чтобы ксилол стекал и дал секциям высохнуть.