Окрашивание кристаллическим фиолетовым цветом: метод визуализации устойчивых к лекарствам раковых клеток с помощью анализов на образование колоний

В гетерогенной популяции опухолевых клеток лечение противораковым препаратом убило бы большинство клеток, но устойчивые к лекарствам клетки выживают, что приводит к терапевтической неудаче.

Чтобы определить долю устойчивых к лекарствам клеток, засейте популяцию гетерогенных опухолевых клеток в многолуночный планшет. Инкубируйте для облегчения адгезии клеток. Добавляйте в возрастающую концентрацию подходящий противоопухолевый раствор препарата.

Взаимодействие с молекулами препарата приводит к гибели чувствительных клеток и, впоследствии, к их отделению от культивальных планшетов. Напротив, лекарственно-устойчивые клетки выживают и остаются прикрепленными к пластине.

Отсадите отработанную среду, чтобы удалить отслоившиеся клетки. Добавьте свежую немедикаментозную среду и инкубируйте планшет в физиологических условиях. Лекарственно-устойчивые клетки размножаются и образуют колонии опухолей. Теперь добавьте в колонии кристаллический раствор для окрашивания фиолетового цвета и инкубируйте.

Кристаллический фиолетовый, фиолетовый, проницаемый для мембран, положительно заряженный краситель проникает в клетки и связывает анионные белки и ДНК, тем самым придавая клеткам фиолетовый цвет.

Дале