Окрашивание липидными каплями личинок эноцитов дрозофилы: методика оценки накопления липидных капель в нормальных и стрессовых условиях с использованием красителя на основе BODIPY

Эноциты личинок дрозофилы представляют собой специализированные клетки, которые прикрепляются в виде дискретных скоплений на базальной поверхности латерального эпидермиса – поверхностного слоя кожи. Эти эноциты в первую очередь участвуют в липидном обмене.

Во время голодания эти эноциты накапливают лишние липидные капли. Каждая капля состоит из гидрофобного ядра нейтральных липидов, таких как триглицериды, и эфиров холестерина, окруженных монослоем фосфолипидов.

Чтобы визуализировать липидные капли, берут рассеченный срез эпидермиса личинок дрозофилы с прикрепленными эноцитами. Обработайте фиксирующим буфером, содержащим параформальдегид, для сшивания клеточных белков, таких как протеазы, и сохранения структурной целостности эноцитов. Снимите фиксирующий буфер. Инкубируйте с флуоресцентным красителем на основе BODIPY в темноте, чтобы избежать фотообесцвечивания.

Во время инкубации неполярный краситель диффундирует по клеточной мембране эноцитов и проникает через монослой, окружающий липидные капли. Гидрофобность молекул красителя позволяет им перемещаться в неполярное ядро липидных капель для связывания нейтральных липидов.

Установите образец на предметное стекло так, чтобы эноциты