Серебряное окрашивание сульфатированных гликозаминогликанов: метод окрашивания для визуализации сульфатированных гликозаминогликанов в полиакриламидных гелях
Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 3:15 мин. • July 8th, 2025
Сульфатированные гликозаминогликаны, ГАГ, представляют собой длинные, отрицательно заряженные, линейные полисахариды с повторяющимися цепочками дисахаридных звеньев, сульфатированными в различных положениях, существующими различной длины.
Чтобы визуализировать интересующие нас изолированные сульфатированные ГАГ, различающиеся по длине цепи в полиакриламидном геле после электрофореза, осторожно извлеките гель из кассеты. Промойте деионизированной водой, удаляя прикрепленные кусочки геля, которые могут помешать окрашиванию.
Обработайте кислым раствором альцианского синего. В кислых условиях Alcian blue, поливалентный катионный краситель с атомом меди в центре, специфически взаимодействует с отрицательно заряженными сульфатированными GAG посредством ионных взаимодействий, образуя темно-синий нерастворимый в воде комплекс.
Смойте гель деионизированной водой и метанолом, удалив остатки пятна. Инкубируйте гель с раствором щелочной селитры серебра. В щелочных условиях сульфатированные ГАГ в связывании с алкийским синим обеспечивают участки для связывания и образования комплекса положительно заряженных ионов серебра.
Обработайте гель в развивающем растворе, содержащем формальдегид и лимонн
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео