Окрашивание по Гимзе для анализа на образование колоний: процедура окрашивания in vitro для оценки пролиферативной способности мезенхимальных стволовых клеток

Анализы на образование колоний измеряют пролиферативную способность клеток к росту в колонии.

Во-первых, суспензию клеток, полученных из костного мозга, содержащую эритроциты и мононуклеарные клетки, включая мезенхимальные стволовые клетки или МСК, в среде на культуральном планшете и в инкубаторе. МСК, прилипают к дну пластины, в то время как эритроциты и мононуклеарные клетки остаются во взвешенном состоянии и отбрасываются

от них.

Добавьте свежие среды, содержащие факторы роста для поддержания выживаемости МСК. В зависимости от их индивидуального пролиферативного потенциала, МСК реплицируются с образованием колоний.

Далее обработайте колонии метанолом. Метанол проникает в клетки, вытесняет воду из внутриклеточной среды и денатурирует белки, сохраняя клеточную архитектуру.

Инкубируют неподвижные колонии с окрашивающим раствором Гимзы - смесью продуктов окисления метиленового синего, в первую очередь лазурного В, основного красителя, и эозина Y, кислотного красителя. При диффузии в клетки положительно заряженные лазурные димеры B связываются посредством интеркаляции с отрицательно заряженной ДНК в ядре, придавая ей синий оттенок.

Затем отрицательно заряженные мономера эозина Y взаи