JoVE Encyclopedia of Experiments
Биологические методы
0 просмотров • 2:50 мин • July 8th, 2025
Эпителий фаллопиевых труб состоит из секреторных клеток, которые производят богатую питательными веществами жидкость, и реснитчатых клеток, которые продвигают омываемую жидкостью яйцеклетку к матке. Морфологические изменения и потеря функциональных функций в клетках маточных труб связаны с раком фаллопиевых труб.
Чтобы визуализировать морфологию маточных труб, возьмите смазанное тканью предметное стекло и окуните его в этанол, чтобы зафиксировать его цитологические особенности. Промойте предметное стекло в воде, чтобы удалить излишки фиксатора.
Теперь окуните предметное стекло в гематоксилин, катионный краситель, который связывает отрицательно заряженную ДНК, окрашивая ядро в синий цвет. Промойте предметное стекло водой, а затем этанолом, чтобы предотвратить чрезмерное загрязнение.
После этого погрузите предметное стекло в краситель Eosin Azure - полихромный раствор коричневого Бисмарка, Эозина Y и зеленого Фаста, смешанный с фосфовольфрамовой кислотой. Bismarck brown осаждивает фосфовольфрамовую кислоту, протраву, используемую Eosin Y, и Fast green для дифференциального окрашивания нераковых трубных клеток и метаболически активных раковых клеток.
Повторите этап водно-спиртового полоскания. Наконец, погрузите предметное стекло в ксилол - очищающее средство, которое удаляет излишки пятен. После этого установите предметное стекло и визуализируйте его под микроскопом.
Нормальный эпителий фаллопиевых труб представляет собой организованный слой светло-голубых окрашенных, реснитчатых и секреторных клеток. Напротив, злокачественные клетки в эпителии выглядят как клеточные кластеры с темными ядрами.
Перед окрашиванием ячеек загрузите флакон с образцом в автоматизированный процессор для подготовки предметного стекла. Когда предметные стекла будут готовы, окуните образцы в 95% этанол 10 раз на 1 секунду за погружение, а затем 10 раз погрузите в воду на 1 секунду за погружение.
Затем погрузите предметные стекла в гематоксилин на 10-60 секунд, после чего последует вторая промывка водой и этанолом. После последнего погружения этанола погрузите слайды в Eosin Azure на 1-3 минуты, после чего еще раз промойте водой с этанолом. Затем окуните предметные стекла в ксилол; пока образцы не станут прозрачными.