Красное поляризационное окрашивание Picrosirius: метод выявления фиброза в срезах сердечной ткани с помощью светлопольной микроскопии

Фиброз – это повышенное отложение фибриллярного коллагена во внеклеточном матриксе поврежденной ткани. Структурно он состоит из полипептидных цепей коллагена с тройной спиралью.

Чтобы окрашивать коллаген красным красителем пикрозиус, возьмите фиксированный параформальдегидом, залитый парафином, участок сердечной ткани. Погрузите участок ткани в ксилол - органический растворитель - чтобы растворить окружающий воск.

Последовательно обрабатывайте депарафинизированную ткань с уменьшением концентрации спирта для замены ксилола. Погрузите ткань в воду, чтобы увлажнить ее для лучшей визуализации пятен на последующих этапах.

Опустите ткань в раствор пикросириуса красного, содержащий Сириус красный - анионный азокраситель - и пикриновую кислоту.

Sirius red содержит кислые сульфокислоты, которые взаимодействуют с основными аминогруппами лизином, гидроксилизином и аргинином, присутствующими в коллагене. Пикриновая кислота помогает поддерживать кислотный pH, способствуя связыванию молекул красителя в параллельной ориентации с коллагеном.

Промойте предметные стекла в подкисленном растворе, чтобы удалить излишки пятна. Нанесите каплю монтажного средства на предметное стекло и рассмотрите его под светлопольным микроскопом.

Фиброзная область, содержащая коллаген, выглядит ярко-красной по сравнению с нефибротическими областями желтого цвета.

После фиксации сердечной ткани поместите ее на устройство для разрезания тканей, разрежьте его на ломтики толщиной 2 миллиметра и поместите срезы в закладную кассету.

После заделки парафина и дополнительного секционирования в соответствии с текстовым протоколом депарафинизируйте слайды, поместив их в резервуар с ксилолом на 30 минут. Затем регидратируйте ткань в последовательно разбавленном спиртовом ряду, а затем дистиллированной воде.

Затем используйте подходящий раствор пикросириуса красного, чтобы полностью покрыть участки ткани, и инкубируйте в течение одного часа. Затем используйте 0,5% раствор уксусной кислоты, чтобы промыть предметные стекла два раза, и дважды промойте образцы в абсолютном спирте.

Высушите образцы на воздухе и закрепите их в синтетической смоле с помощью покровного стекла. Затем используйте видимый свет под микроскопом при 200-кратном увеличении, чтобы получить изображение предметных стекол.