Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 2:30 мин. • July 8th, 2025
В растениях лигнин - сложный биополимер - обычно откладывается в клеточных стенках тканей для обеспечения поддержки.
Лигнификация преимущественно обнаруживается во вторичных утолщениях клеточной стенки водно-проводящих ксилемных клеток, таких как сосуды и волокна, и экстра-ксиларных клеток, таких как межфасцикулярные волокна.
Структурно лигнин состоит из сшитых предшественников монолигнола. Эти ароматические спирты полимеризуются, образуя сильно разветвленную структуру. Эта особенность повышает прочность и жесткость растения.
Чтобы визуализировать осаждение лигнина с помощью окрашивания по Визнеру, возьмите поперечные сечения двудольных стеблей с агарозой, полученные из средней или нижней части растения. Добавьте их в микроцентрифужную пробирку, содержащую подходящий буфер.
Добавьте приготовленный раствор для окрашивания, который содержит подкисленный флороглюцинол и этанол, на срезы стебля. Спирты, присутствующие в лигнине, вступают в реакцию с флороглюцинолом и этанолом с образованием розового пигмента. Это приводит к развитию розовой окраски, соответствующей отложению лигнина в клеточных стенках специализированных клеток.
Теперь перенесите окрашенный участок на микроскопическое предметное стекло. Аккуратно наденьте покровное стекло на секцию, избегая образования пузырей, чтобы лучше визуализировать ее. Визуализируйте срезы под световым микроскопом.
Розовая окраска в специализированных ксилемных клетках и межфасцикулярные волокна в поперечных срезах стебля подтверждают присутствие лигнина в этих тканях.
Для окрашивания Флороглюцинолом перенесите срезы стебля в микроцентрифужную пробирку. Добавьте 1 миллилитр раствора флороглюцинола в тюбик и немедленно закройте его крышкой, потому что соляная кислота в пятиле для флороглюцинола очень агрессивна. Осторожно переместите трубку, чтобы убедиться, что все секции испачканы. Аккуратно наденьте срезы на отрезанный кончик пипетки и на предметное стекло микроскопа. Накройте секции покровным стеклоподъемником. Наблюдайте за участками при яркопольном освещении. Раствор высыхает в течение 5-10 минут, что приводит к ухудшению качества образцов, поэтому визуализация должна быть завершена в течение этого периода времени.