Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 2:19 мин. • July 8th, 2025
Целлюлоза представляет собой неразветвленный полимер β-глюкозных звеньев, связанных связью β-1→4 и расположенных параллельно с помощью межмолекулярных водородных связей.
Целлюлоза служит основным структурным компонентом клеточной стенки растения, придавая клеткам форму и жесткость и способствуя росту и развитию растений. Доля целлюлозы в клеточной стенке значительно варьируется на протяжении всего растения, в зависимости от типа клеток и стадии роста.
Чтобы визуализировать отложение целлюлозы в стебле, возьмите тонкие поперечные срезы срезов стебля, внедренных в агарозу.
Добавьте красный флуоресцентный краситель Congo и инкубируйте секции.
Молекулы конголезского красного цвета проникают в клеточную стенку и образуют водородные связи с гидроксильными группами целлюлозы, тем самым адсорбироваясь на полимере. Это придает красный цвет эпидермису, коре головного мозга и сердцевине.
Молекулы красителя также диффундируют в сложных клеточных стенках ксилемы и межфасцикулярных волокон, пересекая жесткий лигниновый барьер, тем самым придавая красный цвет и этим тканям.
Теперь промойте секции в воде, чтобы удалить излишки пятна. Перенесите срезы на предметное стекло микроскопа и установите покровную крышку.
При визуализации под флуоресцентным микроскопом эпидермис, кора, центральная сердцевина, ксилема и межфасцикулярные волокна кажутся красными, что соответствует содержанию в них целлюлозы.
Для окрашивания Congo Red переложите срезы стебля в микроцентрифужную пробирку и добавьте 1 миллилитр 0,5% раствора Congo Red. Осторожно пипетируйте 0,5% раствор Congo Red вверх и вниз, не повреждая срезы, перед инкубацией и промыванием срезов, как описано в текстовом протоколе. Аккуратно наденьте срезы на отрезанный наконечник пипетки на предметное стекло микроскопа, затем накройте их покровным стеклом. Наблюдайте за образцами на предметном стекле микроскопа под воздействием синего света с помощью эмиссионного фильтра с яркостью 560 нанометров.