JoVE Encyclopedia of Experiments
Биологические методы
0 просмотров • 2:37 мин • July 8th, 2025
В растительных клетках клеточная стенка, специализированный защитный слой, окружает плазматическую мембрану. Клеточная стенка преимущественно состоит из целлюлозы, линейного, неразветвленного полисахарида мономеров глюкозы, связанных конец в конец через гликозидные связи β-1,4.
Целлюлоза существует в агрегированном состоянии в виде ортогонально расположенных целлюлозных микрофибрилл, встроенных в гемицеллюлозу, пектин и белковый матрикс.
Некоторые клетки, такие как клетки сосудистой ксилемы и межфасцикулярных волокон, также содержат лигнин, отвердяющий агент, в своих клеточных стенках.
Чтобы визуализировать отложение целлюлозы в клеточных стенках растений, начните с поперечных срезов стебля двудольного растения в буфере, встроенных в агарозу. Добавьте водный раствор калькофтор белил, хемифлуоресцентный, планарный краситель. Инкубируйте, чтобы краситель диффундировал в ткани.
Попадая внутрь, калькофтор белый через свои гидроксильные функциональные группы взаимодействует и образует водородные связи с гидроксильными группами мономеров глюкозы в целлюлозе. Это приводит к тому, что краситель находится в непосредственной близости от целлюлозы и способствует дополнительным ван-дер-ваальсовым взаимодействиям, что приводит к образованию стабильного комплекса красителя и целлюлозы.
Перенесите секции стебля на предметное стекло и установите покровное стекло. Под воздействием ультрафиолетового света молекулы красителя, связанные с целлюлозой, флуоресцируют ярко-белым цветом.
Клетки эпидермиса, коры и сердцевины демонстрируют интенсивную флуоресценцию с четко очерченными контурами клеточной стенки из-за высокого содержания целлюлозы. Для сравнения, клетки ксилемы и межфасцикулярных волокон флуоресцируют тускло, что, возможно, указывает на недостаточную диффузию красителя из-за присутствия лигнина.
Для окрашивания белым калькофтором перенесите срезы стержня в микроцентрифужную пробирку и добавьте один миллилитр 0,02% раствора калькофторовых белил. Аккуратно пипетируйте раствор вверх и вниз. Приступайте к инкубации и промойте секции, как указано в текстовом протоколе, прежде чем наблюдать за секциями под ультрафиолетовым светом.