Очистка белков на основе аниообменной хроматографии: метод разделения для выделения представляющего интерес белка из диализованного бактериального лизата на основе чистого заряда

Для анионообменной хроматографии отделения интересующего белка от лизата диализованного бактериального белка добавляют связывающий буфер для снижения вязкости лизата и предотвращения его засорения хроматографической колонки.

Хелатирующие агенты в буфере связывают двухвалентные катионы, подавляя активность протеазы и предотвращая деградацию белка. Кроме того, буфер с pH выше изоэлектрической точки белка-мишени, pI, pI, при котором белок не имеет суммарного заряда, заставляет избыток отрицательно заряженных гидроксильных ионов нейтрализовать положительно заряженные аминные группы белка, делая поверхность белка отрицательно заряженной.

Соберите колонку анионообменной хроматографии, содержащую сшитую неподвижную фазу на основе агарозы с положительно заряженными четвертичными аминными группами. Добавьте связующий буфер, чтобы подготовить колонку к максимальному взаимодействию белка во время загрузки образца. Загрузите разведенный бактериальный лизат.

Отрицательно заряженные белки-мишени более прочно связываются с положительно заряженными группами в колонке, чем менее отрицательно заряженные белки.

Запустите связывающий буфер, чтобы удалить несвязанные положительно заряженные белки из ко