Кальций-зависимая гидрофобная хроматография: метод очистки кальций-связывающих белков на основе гидрофобных взаимодействий

Кальций-зависимая гидрофобная интеракционная хроматография — это метод отделения кальций-связывающих белков от других некальций-связывающих белков в образце.

Для начала возьмем предварительно собранную хроматографическую колонку, содержащую матрицу из сшитых агарозных шариков, дериватизированных гидрофобными фенильными группами для облегчения взаимодействия с белками-мишенями. Уравновесьте его с помощью связывающего буфера, содержащего очень высокую концентрацию ионов кальция для максимального взаимодействия смолы и целевого белка при последующей загрузке образца.

Возьмите образец, содержащий диализованную белковую смесь, и добавьте в него концентрацию хлорида кальция в той же концентрации, которая используется в буфере для связывания для уравновешивания колонки. Это максимизирует связывание белка с колонкой.

Ионы кальция связываются со специфическими белками в лизате, вызывая конформационные изменения в этих белковых молекулах, обнажая их гидрофобные области.

Отфильтруйте смесь, чтобы отделить примеси и заполнители, чтобы они не засоряли колонку. Загрузите этот фильтрат в предварительно уравновешенную колонку. Белки с обнаженными гидрофобными областями взаимодействуют с соответств