Очистка белков на основе аффинной хроматографии никеля: метод очистки рекомбинантных белков, меченных полигистидином, от лизата бактериальных клеток

Чтобы очистить рекомбинантный белок, слитый с полигистидиновой меткой - цепочкой остатков гистидина на одном конце - из лизата бактериальной клетки, сначала разбавьте клеточный лизат, чтобы предотвратить засорение колонки во время хроматографического прогона.

Соберите аффинную колонку, содержащую катионы двухвалентного никеля, иммобилизованные на матрицу шариков агарозы, с помощью нитрилотриуксусной кислоты, хелатирующего агента. Нитрилотриуксусная кислота связывается с катионами никеля через четыре координатных ковалентных сайта, в то время как два сайта на ионе металла остаются доступными для взаимодействия с полигистидиновыми метками в интересующем белке.

Уравновесьте колонку подходящим буфером, чтобы оптимизировать условия для эффективного взаимодействия металлов и белков. Загрузите лизат клеток на колонку.

Рекомбинантные белки, несущие доступные концевые остатки гистидина, образуют координационные связи с катионами никеля благодаря высокому сродству иона металла к имидазолу, боковой цепи гистидина, и связываются с матрицей. Большое количество последовательных гистидинов в рекомбинантном белке усиливает его прикрепление к матриксу.

Для сравнения, белки, лишенные остатков гистид