$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Клеточная стенка микобактерий содержит различные варианты миколиевых кислот – длинноцепочечные жирные кислоты с консервативными альфа-цепями. В их бета-цепях существуют структурные различия, что приводит к вариациям полярности различных миколовых кислот.
Чтобы разделить варианты с помощью тонкослойной хроматографии, или ТСХ – метода жидкостной хроматографии – берут липиды клеточной стенки микобактерий в нужном органическом растворителе. Обнажите липиды у основания пластины TLC, предварительно покрытой тонким слоем адсорбирующего материала, который функционирует как неподвижная фаза.
Поместите планшет в банку, содержащую органический растворитель - подвижную фазу, - убедившись, что уровень жидкости находится ниже пятен образца, чтобы предотвратить преждевременную диффузию миколиевых кислот.
Во время прогона подвижная фаза поднимается через крошечные поры адсорбентного слоя на пластине за счет капиллярного действия. В конце концов, миколовые кислоты растворяются в растворителе и перемещаются вверх.
Более полярные варианты миколиевой кислоты временно адсорбируются полярной стационарной фазой с помощью межмолекулярных сил, препятствуя их восходящему движению. Меньшее количество полярных миколовых кислот остается в неполярной подвижной фазе и мигрирует дальше.
Различия в миграции приводят к тому, что варианты миколиевой кислоты разделяются на дискретные полосы.
По завершению опрыскайте высохшую пластину пятном с фосфомолибдоновой кислотой. Нагрейте пластину, чтобы уменьшить пятно в присутствии липидов, придающих полосам темно-зеленый цвет.
Для анализа образцов методом ТСХ накройте одну стенку камеры ТСХ листом фильтровальной бумаги. Нанесите вазелин на углы камеры, чтобы запечатать камеру. Сцедите смесь растворителя на фильтровальную бумагу и добавьте оставшийся объем растворителя на дно камеры TLC. Закройте камеру TLC не менее чем на 20 минут, чтобы насытить ее
Тем временем растворите липиды в стеклянной трубке в 200-1000 микролитрах хлороформа и с помощью капиллярной стеклянной трубки нанесите 10 микролитров липидно-хлороформной суспензии непосредственно на пластину TLC. Дав образцу высохнуть в течение пяти минут, вставьте планшет в насыщенную камеру TLC и дайте подвижной фазе пройти через TLC.
Когда растворитель достигнет 1 сантиметра от верхнего конца пластины, поместите пластину под ламинарный флюс до полного высыхания диоксида кремния. Затем распылите на высушенную пластину от 15 до 20 миллилитров 10% гидрата молибдатофосфорной кислоты в этаноле, пока пластина не станет ярко-желтой, и нагрейте пластину в течение двух-пяти минут при температуре 120 градусов Цельсия.