Очистка бакуловируса на основе гепариновой аффинной хроматографии: метод выделения бакуловируса из надосадочной жидкости клеток насекомых

Бакуловирусы - вирусы с двухцепочечной ДНК - окружены оболочкой, содержащей основные вирусные гликопротеины, такие как GP64.

Чтобы выделить бакуловирусы из надосадочной жидкости клеточной культуры, содержащей клеточный мусор и загрязняющие белки, соберите колонку гепариновой аффинной хроматографии, содержащую матрицу из сшитых агарозных шариков. Эти шарики связаны с гепарином, линейным полисахаридом с сульфатными группами, которые придают отрицательный заряд гепариновой цепи.

Уравновесьте колонку промывочным буфером, имеющим нейтральный pH и оптимальную ионную силу, чтобы обеспечить благоприятные условия для максимального взаимодействия бакуловируса и гепарина при надсадочной нагрузке. Загрузите в колонку содержащую бакуловирус надосадочную жидкость.

Основные аминокислоты бакуловируса GP64 способствуют неспецифическому электростатическому взаимодействию с отрицательно заряженным гепарином и прочно связываются с колонкой, в отличие от загрязняющих веществ, которые связываются слабо. Промойте колонку промывочным буфером, удаляя несвязанные и слабосвязанные загрязняющие белки и мусор.

Пропустите элюирующий буфер с более высокой ионной силой, чем промывочный буфер, через колонну. Более