Катионообменная хроматография: метод выделения целевого рекомбинантного белка из лизата клеток насекомых на основе чистого поверхностного заряда

Катионообменная хроматография способствует отделению белков от смесей на основе их чистого поверхностного заряда.

Для выделения белка преобразователя сигнала-мишени из лизата белка клетки насекомого получают диализированный лизат белка-мишени, содержащий другие загрязняющие белки. Добавьте хлорид натрия в буфер для снижения вязкости лизата и улучшения растворимости белка, что помогает предотвратить засорение хроматографической колонки во время работы.

Кроме того, буферный pH ниже изоэлектрической точки белка-мишени, pI, при которой белок имеет нулевой суммарный заряд, способствует связыванию избыточных ионов водорода с отрицательными карбоксилатными группами, делая целевой белок положительно заряженным.

Соберите хроматографическую колонку, содержащую сшитые агарозные шарики, соединенные с отрицательно заряженными группами. Добавьте связывающий буфер для уравновешивания колонки и максимизации взаимодействия колонки с белком. Загрузите разведенный лизат на уравновешенную колонку.

Более положительно заряженные белки-мишени взаимодействуют и прочно связываются с отрицательно заряженными группами колонки, чем менее положительно заряженные загрязняющие белки.

Промойте колонку с буфером,